Invitrogen™ Click-iT™ Nascent RNA Capture Kit, til genekspressionsanalyse

De Click-iT Nascent RNA Capture Kit, bruger proprietær Click-iT kemi til at fange med høj effektivitet og følsomhed nyslåede RNA'er. Ved Click-iT tilgangsundersøgelser af højopløsningsanalyse af genregulering kan udføres sammen med RNA-regulering, RNA-stabilitet, RNA-syntese, RNA-henfald og nedbrydning, transkriptionel regulering, delta/delta C(t), nuklear run on/run off og mere. Ethylenuridin (EU) ribonukleotidhomologer, der indeholder en alkynreaktiv gruppe, tilføres celler eller væv. Når de er inkorporeret, lyseres celler, og RNA'et isoleres. Et biotinazid er“ klikket på” og derefter bruges strepavidin magnetiske perler til at fange den nyligt syntetiserede pulje af RNA. De indfangede RNA'er amplificeres derefter, og de resulterende cDNA'er anvendes på et hvilket som helst antal post-capture-metodologier. Vi har valideret det for arrays (både høj og lav tæthed), sekventering på SOLiD™ og enten SYBR™ eller TaqMan™ baseret qPCR baseret delta CT analyse. Så få som 25.000 celler er nødvendige til analyse af nyligt inducerede transkripter. Sættet giver mulighed for 40 betingelser for mærkning og indfangning, som derefter kan opdeles i 400 separate analytiske assays. Med en pris på omkring dollar en assy er dette perfekt til forskere i den akademiske verden og industrielle omgivelser. EU-reagenset i den anbefalede koncentration på μ200 M tolereres godt af celler. I en array-screening med over 32.000 gener kunne kun de mindste ændringer i 12 i forhold til et kontrolvehikel påvises. Ydermere var der ved initial fodringskoncentration 5x af, hvad vi μanbefaler (200 M vs. 1,0 mM), ingen effekter på et panel af husholdningsgener eller på cellernes evne til at proliferere normalt. Følsomhed og pålidelighed blev bekræftet i et array med lav tæthed (TLDA™ ) af apoptotiske gener. Den fangede begyndende pool fandt nøjagtigt alle de tidligere karakteriserede apoptotiske (stauroporin-inducerede) transkripter uden nogen påviselig ændring i sekvensinformation.

• Mindre farligt

Opdagelse ikke kun genopretning. De sidste årtier har genomisk indsats afsløret, at kun 2% af mennesket koder for protein, hvilket efterlader 98% af det menneskelige genom som Unknome. At opdage formålet og udtryksmønstrene for dette enorme reservoir af ukendt sekvens vil blive markant hjulpet i dette årtis transkriptomik af denne nye tilgang.

Klikkemi, DNA- og RNA-oprensning og -analyse, genekspressionsanalyse og genotypning, mærkningskemi, mikroarray-analyse, begyndende RNA-detektion og -indfangning med klikkemi, nukleinsyremærkning og Oligo Syntese, RNA-isolering til ekspressionsmikroarrays, RNA-mærkning