Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptose Assay Kits til flowcytometri

Caspase-assay-kits Vybrant FAM til flowcytometri anvender en ny tilgang til at opdage aktive caspaser: Sættene udnytter FLICA metodologien, som er en affinitetsbetegnelse. Denne affinitetsetiket associerer en fluoromethylketon (FMK)-gruppe, som kan reagere kovalent med en cystein, med en caspase-specifik aminosyresekvens. Forskellige aminosyregenkendelsessekvenser bruges til at detektere forskellige caspaser: valin-alanin-asparaginsyre (VAD) for polykaspaser (inklusive caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 og -9), asparaginsyre-glutaminsyre-valin-asparaginsyre (DEVD) for caspase-3/7, og leucin-glutaminsyre-threonin-asparaginsyre (LETD) for caspase-8. En carboxyfluorescein (FAM) gruppe er tilknyttet som reporter.

Reagensen FLICA menes at interagere med det enzymatiske reaktive center i en aktiveret caspase via genkendelsessekvensen og derefter binde kovalent gennem FMK-gruppen. Inhibitoren FLICA er cellebaseret og ikke-cytotoksisk. Ubundne FLICA molekyler diffunderer ud af cellen og skylles væk; det resterende fluorescerende signal er et direkte mål for mængden af aktiv caspase, der var til stede på tidspunktet for tilsætningen af inhibitoren. De omtrentlige excitations- og emissionstoppe for FLICA, propidiumiodid og Hoechst 33342 reagenser er henholdsvis 488 nm/530 nm, 535 nm/6617 nm og 350 nm/461 nm. De detektionsreagenser, der indgår i de enkelte Vybrant FAM Poly Caspases Assay, Caspase-3 og -7 Assay samt Caspase-8 Assay apoptose-kits, er henholdsvis 488/530 FAM-VAD-FMK reagens, 488/530 FAM-DEVD-FMK og 488/530 FAM-LETD-FMK.