Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptose Assay Kits til flowcytometri

De Vybrant FAM caspase-assaysæt til flowcytometri anvender en ny tilgang til påvisning af aktive caspaser: sættene drage fordel af FLICA metode, som er et affinitetsmærke. Dette affinitetsmærke forbinder en fluormethylketon (FMK) del, som kan reagere kovalent med et cystein, med en caspase-specifik aminosyresekvens. Forskellige aminosyregenkendelsessekvenser bruges til at detektere forskellige caspaser: valin-alanin-asparaginsyre (VAD) til polycaspaser (inklusive caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 og -9), asparaginsyre-glutaminsyre-valin-asparaginsyre (DEVD) for caspase-3/7 og leucin-sparaginsyre-a-threoninsyre (athreoninsyreD) for caspase-8. Et carboxyfluorescein (FAM ) gruppe er tilknyttet som reporter.

De FLICA reagens menes at interagere med det enzymatiske reaktive center af en aktiveret caspase via genkendelsessekvensen og derefter at binde kovalent gennem FMK-delen. De FLICA inhibitor er cellegennemtrængende og ikke-cytotoksisk. Ubundet FLICA molekyler diffunderer ud af cellen og vaskes væk; det resterende fluorescerende signal er et direkte mål for mængden af aktiv caspase til stede på det tidspunkt, hvor inhibitoren blev tilsat. De omtrentlige excitations- og emissionstoppe for FLICA propidiumiodid og Hoechst 33342 reagenser er 488 nm/⁄ 530 nm, 535⁄ nm/6617 nm og 350 nm/⁄ 461 nm, hhv. Detektionsreagenserne inkluderet i individet Vybrant FAM Poly Caspases Assay, Caspase-3 og -7 Assay og Caspase-8 Assay apoptosesæt er 488⁄ ⁄530 FAM-VAD-FMK reagens, 488/⁄ 530 FAM-DEVD-FMK og 488/⁄ 530 FAM-LETD-FMK hhv.