Applied Biosystems™ ViralSEQ™ Mouse Minute Virus (MMV) Detektionssystem

Høj specificitet og hurtig time-to-result
ViralSEQ MMV-assay påviser de fire kendte stammer af MMV: i, p, m og c, inklusive syv genomiske sekvenser rapporteret i NCBI-databasen. Tabel 1 viser specificiteten af MMV-assayen ViralSEQ og manglen på krydsreaktivitet med ikke-relateret DNA. Assay-workflowet er enkelt og leverer resultater på under 4 timer (Figur 1).

Strømlinet proces for overvågning og tidlig opdagelse
ViralSEQ MMV Detection Assay er en del af Cell Culture Rapid Methods Program, designet til at effektivisere påvisningen af tre almindelige forurenende stoffer i biofarmaceutisk produktion baseret på cellekulturer hos pattedyr (Figur 2). Programmet fastsætter nye workflow-standarder for effektivitet og produktkvalitet ved at kombinere ét prøveforberedelsestrin med realtids PCR-baserede assays til detektion af mycoplasma, vesivirus og MMV på én instrumentplatform.

Pålidelige resultater
ViralSEQ MMV Detection Assay inkluderer en MMV Discriminatory Positive/Extraction Control, som er et plasmid-DNA, der indeholder MMV DNA-sekvensen, som genkendes af MMV detection assay (FAM proben). Denne kontrol (Figur 3) var designet til at opføre sig som MMV-DNA både i prøveforberedelsen og detektionsdelen af processen. Derudover blev kontrollen konstrueret med en ekstra VIC probe-bindingssekvens. Tilstedeværelsen af både FAM og signal VIC i en PCR-reaktion kan bruges til at skelne et positivt testresultat mellem MMV (FAM) og kontrol-DNA (FAM og VIC). Denne nye kontrol muliggør risikofri DNA-spike-kontroltestning og eliminerer muligheden for falsk positivt testresultat på grund af utilsigtet krydskontaminering af en testprøve med det positive kontrol-DNA.

Lavniveaudetektion
ViralSEQ MMV Detection Assay bruger dokumenteret TaqMan teknologi til højfølsomhedsdetektion ned til 10 kopier af MMV genomisk DNA pr. PCR-reaktion (virale partikler svarende til 0,002 TCID50). Analyse af 10-fold serielle fortyndinger af MMV genomisk DNA demonstrerer assays brede dynamiske område og effektivitet (figur 4 og 5).

Overlegen prøveforberedelsesmetode
1-2-3 Nukleinsyreekstraktionssættet PrepSEQ (tilgængeligt separat, Kat. Nr. 4452222) hjælper med at muliggøre ensartet og høj procentuel genvinding af MMV-genomisk DNA fra komplekse prøvetyper, der inkluderer CHO celler og bovint serum. Figur 6 viser, at CT-værdierne af DNA udvundet fra en spiked prøve var sammenlignelige med en ikke-spiked kontrol, der blev forstærket i realtids PCR-reaktionen, hvilket demonstrerer den meget effektive DNA-genvinding ved brug af 1-2-3 sættet PrepSEQ .