Applied Biosystems™ ViralSEQ™ Mouse Minute Virus (MMV) Detektionssystem

De Applied Biosystems ViralSEQ Mouse Minute Virus (MMV) Detection Assay er en del af et integreret DNA-oprensning og real-time PCR-baseret system til hurtig, følsom påvisning af MMV fra en lang række prøvetyper. Viralt DNA isoleres fra en prøve ved hjælp af PrepSEQ 1-2-3 Nucleic Acid Extraction Kit (tilgængelig separat). Meget følsom og specifik påvisning af det virale DNA udføres derefter vha TaqMan PCR-teknologi i realtid. Analysen inkluderer et proprietært positivt kontrolmolekyle, der eliminerer muligheden for et falsk positivt testresultat, der skyldes utilsigtet kontaminering af testprøven med positiv kontrol.

Høj specificitet og hurtig tid til resultater

De ViralSEQ MMV-assay detekterer de fire kendte stammer af MMV: i, p, m og c, inklusive syv genomiske sekvenser rapporteret i NCBI-databasen. Tabel 1 viser specificiteten af ViralSEQ MMV-assay og mangel på krydsreaktivitet med ikke-relateret DNA. Analysearbejdsgangen er enkel og leverer resultater på knap 4 timer (figur 1).

Strømlinet proces til overvågning og tidlig detektion

De ViralSEQ MMV Detection Assay er en del af Cell Culture Rapid Methods-programmet, designet til at strømline påvisningen af tre almindelige kontaminanter fra pattedyrcellekultur-baseret biofarmaceutisk fremstilling (figur 2). Programmet sætter nye standarder for arbejdsgange inden for effektivitet og produktkvalitet, der kombinerer ét prøveforberedelsestrin med real-time PCR-baserede assays til påvisning af mycoplasma, vesivirus og MMV på én instrumentplatform.

Pålidelige resultater

De ViralSEQ MMV Detection Assay inkluderer en MMV Discriminatory Positive/Extraction Control, som er et plasmid DNA, der indeholder MMV DNA sekvensen, der genkendes af MMV detektion assay (FAM sonde). Denne kontrol (figur 3) blev designet til at opføre sig som MMV-DNA i både prøveforberedelsen og detektionsdelen af processen. Derudover blev kontrollen konstrueret med en ekstra VIC probebindingssekvens. Tilstedeværelsen af begge FAM og VIC signal i en PCR-reaktion kan bruges til at skelne et positivt testresultat mellem MMV (FAM ) og kontrol-DNA (FAM og VIC ). Denne nye kontrol muliggør risikofri DNA-spidskontroltest, hvilket eliminerer muligheden for et falsk positivt testresultat på grund af utilsigtet krydskontaminering af en testprøve med det positive kontrol-DNA.

Detektion på lavt niveau

De ViralSEQ MMV Detection Assay anvender bevist TaqMan teknologi til højsensitiv påvisning ned til 10 kopier af MMV genomisk DNA pr. PCR-reaktion (virale partikler svarende til 0,002 TCID50). Analyse af 10-fold serielle fortyndinger af MMV genomisk DNA viser assayets brede dynamiske område og effektivitet (figur 4 og 5).

Overlegen prøveforberedelsesmetode

PrepSEQ 1-2-3 nukleinsyreekstraktionssættet (tilgængelig separat, kat.nr. 4452222) hjælper med at muliggøre ensartet og høj procentdel genvinding af genomisk MMV-DNA fra komplekse prøvetyper, som omfatter CHO celler og bovint serum. Figur 6 viser, at Ct-værdierne af DNA ekstraheret fra en spiked prøve var sammenlignelige med en uspiked kontrol, der blev amplificeret i real-time PCR-reaktionen, hvilket demonstrerer den højeffektive DNA-gendannelse ved brug af PrepSEQ 1-2-3 kit.