Thermo Scientific™ Tryptiske fordøjelsessæt

Prøveforberedelse er et af de mest variable og tidskrævende trin i analysen af proteiner ved MS, og kvaliteten og reproducerbarheden af prøveekstraktion og forberedelse påvirker resultaterne markant. Lejlighedsvis kræves der yderligere trin for at forbedre prøvekvaliteten, herunder fordøjelse og genvinding af peptidfragmenter fra SDS-PAGE-geler eller peptidguanidinering for at forbedre sekvensdækningen. Hvert kit er blevet optimeret til at producere højkvalitets peptidfordøjelser til pålidelig proteomisk analyse ved brug af massespektrometri.

Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit
Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit giver en optimeret procedure og reagenser til ca. 90 fordøjelser, der hver indeholder 0,025 til 10μ g protein.

•Fuldstændig fordøjelse —trypsin fordøjer fuldstændigt protein i området fra 0,025 til 10μ g (∼ 90 reaktioner)
•Specifik —guanidineringsreaktion frembringer ringe eller ingen N-terminal modifikation
•Praktisk —sæt inkluderer reagenser til fordøjelse, reduktion, alkylering og guanidinering
•Effektivt —protein kan fordøjes og guanidineres på en enkelt dag

Trypsin spalter specifikt peptidbindinger på carboxylsiden af arginin- og lysinrester. Signalerne fra de argininholdige peptider er generelt stærkere på grund af den mere basale sidekæde. For at øge den samlede ionisering omdanner guanidinering lysiner til homoargininer og er specifik for aminen i lysin, men kan forekomme minimalt ved aminen af peptidets N-terminale ende. Denne derivatisering fører til en stigning i intensiteten af de lysinholdige peptider og forbedret sekvensdækning generelt.

Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit
Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit indeholder et komplet sæt reagenser til at udføre ca. 150 fordøjelser på kolloide Coomassie- eller fluorescerende farvestoffarvede proteinbånd. Sættet inkluderer modificeret svinetrypsin, affarvningsbuffere, reduktionsreagenser, alkyleringsreagenser og fordøjelsesbuffere sammen med detaljerede og enkle instruktioner.

•Komplet —inkluderer alle nødvendige reagenser til gelaffarvning, reduktion, alkylering og tryptisk fordøjelse af proteiner
•Robust —optimeret procedure og reagenser producerer pålidelige fordøjelser og datagenerering ved brug af en lang række forhold
•Specifik —indeholder højoprenset og modificeret MS-grade trypsin uden kymotryptisk aktivitet og minimal autolytisk aktivitet

To vigtige prøveforberedelsestrin er den fuldstændige fordøjelse af proteiner til peptider og efterfølgende koncentration og oprensning af peptider til massespektrometrianalyse. Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit udfører det første af disse trin for proteinprøver ekstraheret fra gelskiver. Pierce C-18 Spin-søjler og -spidser udfører det andet trin for at rense prøven, så den er MS-klar.