Thermo Scientific™ Tryptiske fordøjelsessæt

Prøveforberedelse er et af de mest variable og tidskrævende trin i analysen af proteiner med MS, og kvaliteten og reproducerbarheden af prøveudtrækning og -forberedelse har en betydelig indvirkning på resultaterne. Lejlighedsvis kræves yderligere trin for at forbedre prøvekvaliteten, herunder fordøjelse og genvinding af peptidfragmenter fra SDS-PAGE-geler eller peptidguanidinering for at forbedre sekvensdækningen. Hvert sæt er optimeret til at producere peptiddigester af høj kvalitet til pålidelig proteomisk analyse ved brug af massespektrometri.

Pierce Tryptisk fordøjelses- og guanidineringssæt i opløsning

Pierce In-Solution Tryptic Digestion and Guanidination Kit leverer en optimeret procedure og reagenser til cirka 90 fordøjelser, hver med 0,025 til 10 μg protein.

• Fuldstændig fordøjelsestrypsin—fordøjer fuldstændigt proteiner fra 0,025 til 10 μg (∼90 reaktioner)
• Specifik—guanidineringsreaktion giver ringe eller ingen N-terminal modifikation
• Bekvemt—udstyr inkluderer reagenser til fordøjelse, reduktion, alkylation og guanidinering
• Effektivt—protein kan fordøjes og guanidineres på en enkelt dag

Trypsin spalter specifikt peptidbindinger på carboxylsiden af arginin- og lysinrester. Signalerne fra de argininholdige peptider er generelt stærkere på grund af den mere basiske sidekæde. For at øge den samlede ionisering omdanner guanidinering lysiner til homoargininer og er specifik for aminen lysin, men kan forekomme minimalt ved aminen i peptidets N-terminal. Denne derivatisering fører til en øget intensitet af de lysinholdige peptider og forbedret sekvensdækning generelt.

Pierce In-Gel tryptisk fordøjelsessæt

Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit leverer et komplet sæt reagenser til at udføre cirka 150 fordøjelsbehandlinger på kolloidale Coomassie- eller fluorescerende farvefarvede proteinbånd. Sættet indeholder modificeret svinetrypsin, affarvningsbuffere, reduktionsreagenser, alkylationsreagenser og fordøjelsesbuffere samt detaljerede og enkle instruktioner.

• Komplet—indeholder alle nødvendige reagenser til geldefarvning, reduktion, alkylering og tryptisk fordøjelse af proteiner
• Robuste—optimerede procedurer og reagenser producerer pålidelige fordøjelsprocesser og datagenerering under en bred vifte af betingelser
• Specifikt—indeholder højt oprynet og modificeret MS-grad trypsin uden chymotryptisk aktivitet og minimal autolytisk aktivitet

To vigtige prøveforberedelsestrin er den fuldstændige fordøjelse af proteiner til peptider samt efterfølgende koncentration og oprensning af peptider til massespektrometrianalyse. Pierce In-Gel Tryptic Digestion Kit udfører det første af disse trin for proteinprøver udvundet fra gelskiver. Pierce C-18 spinkolonner og -tipper udfører det andet trin for at rense prøven, så den er MS-klar.