Invitrogen™ Thiol Fluorescerende Detection Kit

Protein Thiol Detection-sættet, der kun kan bruges til forskning, er et fluorescerende assay designet til kvantificering og påvisning af proteinthiol i almindelige biologiske buffere, herunder biologiske buffere, herunder tris-, fosfat- og citratbuffere.

Dette komplette, brugsklare sæt inkluderer sorte 96-brønds plader, N-acetylcystein-standard, detektionsreagens, assaybuffer og andre komponenter til at udføre analysen. En 96-brønds mikropladelæser, der er i stand til at aflæse fluorescerende emission ved 510 nm, med excitation ved 390 nm, er påkrævet til brug af dette kit.

Præstationsegenskaber
• Assay type: fluorescerende detektionskit
• Prøvetyper: almindelige biologiske buffere, herunder tris-, fosfat- og citratbuffere
• Følsomhed: 4,62 nM
• Standard kurveområde: 78 –10.000 nM
• Reaktivitet: artsuafhængig

Baggrund
Frie thioler i biologiske systemer har vigtige roller. Oxidativt modificerede thiolgrupper af cysteinrester er kendt for at modulere aktiviteten af et voksende antal proteiner. Et af de mest presserende problemer med denne tilgang er nøjagtigt at bestemme omfanget af modifikation af specifikke aminosyrer, såsom cysteinrester, i en kompleks proteinprøve, især i nærvær af kaotrope midler såsom guandinhydrochlorid.

Dette Thiol fluorescerende detektionskit giver brugerne mulighed for nøjagtigt at bestemme omfanget af frit thiolindhold i prøver ved hjælp af et proprietært ikke-fluorescerende detektionsreagens, der omdannes til et klart fluorescerende produkt ved reaktion med thiolen i prøven. Thiolen i prøven kan enten være en, der genereres af en reaktion, såsom slutproduktet af en enzymatisk reaktion, såsom glutathion, eller kan være cysteinindholdet i proteinet, der skal måles. Denne analyse er blevet testet med prøver i guanidinhydrochloridkoncentrationer på op til 2M i analysebufferen, der er leveret i sættet. Dette gør det muligt at bestemme thiolindholdet i udfoldede proteiner nøjagtigt. Selvom et cysteinderivat er blevet tilvejebragt som en standard, der kan bruges til at kvantificere frie cysteiner på peptider og proteiner, skal assayet kalibreres til en standard, der er så tæt som muligt kemisk på den thiol, der måles. For eksempel, hvis slutbrugeren måler glutathion med kittet, skal analysen kalibreres til et kendt, valideret glutathion-standardpræparat.

Assayprincip Protein Thiol Fluorescent
Detection Kit er designet til kvantitativt at måle thiolgrupper genereret eller til stede i biologiske prøver. En standard leveres til at generere en standardkurve for analysen, og alle prøver skal aflæses fra den genererede kurve. Prøver og standarder pipetteres i en sort mikrotiterplade. Efter blanding af prøven eller standarden med detektionsreagenset og inkubation ved stuetemperatur i en 30-minutters inkubation aflæses det fluorescerende produkt ved 510 nm i en fluorescerende pladelæser med excitation ved 390 nm. Da biologisk genererede frie thioler, såsom glutathion og proteinthiolgrupper, findes i forskellige miljøer, bør mængden af tilstedeværende eller dannet thiol kalibreres ved hjælp af en passende standard.