Thermo Scientific™ MuA Transposase

Mutationsgenerationen System™ Kit (MGS™ Kit) er designet til hurtig konstruktion af insertionsmutationsbiblioteker for enhver form for DNA-kloner. Systemet anvender det højeffektive transpositionsmaskineri af bakteriofagen Mu til at generere en pulje af 15 bp insertionsmutanter, der kan anvendes i en række funktionelle analyser af de kodede proteiner eller regulatoriske DNA-regioner.

Thermo Scientific transposonprodukter er baseret på transponeringsmaskineriet af bakteriofagen Mu. Under den lytiske fase af fagens livscyklus replikerer maskineriet sit genom ved at transponere gentagne gange inde i værtsgenomet. Mu-transpositionsreaktionen er blevet modificeret til en in vitro -reaktion katalyseret af et enkelt enzym - MuA Transposase . I dette system er én in vitro -reaktion i stand til at generere mere end en million transposon-insertionskloner.

Funktioner
Mutationsgenereringssystemet (MGS Kit) og Stop Generation System (STOP Kit) blev udviklet til funktionel analyse af proteiner. Disse nye transposonværktøjer gør det muligt at skabe mættede biblioteker af muterede proteiner i en enkelt reaktion med mindre praktisk tid end nogen anden metode. Placeringen af transposon-insertionen i hver muteret klon kan kortlægges ved enten PCR eller sekventering. Med MGS og STOP-kits er tusindvis af muterede kloner klar til ekspressionsundersøgelser på kun 2 til 3 dage.

De MGS Sættet indeholder det komplette sæt af reagenser til transposon-baseret linker-scanningsmutagenese af ethvert målprotein. De MGS Entranceposoner er designet til at lave subtile ændringer i strukturen af et målprotein ved at indsætte 15 bp in-frame linkere gennem det tilsvarende målgen. Denne in-frame insertion muliggør konservering af nedstrøms sekvenser.

STOPKit Entranceposons indeholder translationelle stopkodoner i alle tre læserammer i den terminale del af transposonsekvensen. Den proprietære modifikation af Stop Generation System gør det muligt at generere et mættet C-terminal deletionsbibliotek fra stort set ethvert målprotein med en maksimal tilføjelse på tre aminosyrer.

Højdepunkter

• Effektiv - Opret mættede insertionsbiblioteker til sekventering og proteinanalyse i en enkelt reaktion
• Hurtigt - Reducer praktisk tid sammenlignet med konventionelle metoder
• Tilfældig - Eliminer præference for målsted eller indsættelse af hotspot

• Enzymer
• Receptorer
• Strukturelle proteiner mv.
  De MGS Kit genererer tilfældige femten basepar in vitro -insertioner i ethvert mål-DNA for:
• Hurtig generering af in-frame fem aminosyre insertionsbiblioteker af ethvert protein til funktionelle analyser
• Hurtig og tilfældig mutagenese af klonede promotorer og andre regulatoriske DNA-regioner
• Tilfældig indsættelse af et NotI- restriktionsenzymsted i enhver mål-DNA-klon

• MuA Transposase (F-750):
• MuA Transposase (0,22μ g/μ L, 20μ L)
• 5x reaktionsbuffer

• MuA Transposase koncentreret (1.1μ g/μ L, 20μ L)
• 5x reaktionsbuffer
• MuA lagerbuffer

• MuA Transposase (0,22μ g/μ L i MuA-lagerbuffer)
• Indgangsposon (STOP-KanR) (100 ng/μ L i TE-buffer)
• 5x reaktionsbuffer til MuA Transposase
• DMSO 100 %
• Kontrolmål DNA (370 ng/μ L i TE-buffer)
• MuEnd-2 Primer (25μ M i dd vand)
• SeqE Primer (10μ M i dd vand)
• SeqW Primer (10μ M i dd vand)

• MuA Transposase (0,22μ g/μ L i MuA-lagerbuffer)
• Indgangsposon (M1-CamR) (100 ng/μ L i TE-buffer)
• Indgangsposon (M1-KanR) (100 ng/μ L i TE-buffer)
• 5x reaktionsbuffer til MuA Transposase
• Kontrolmål DNA (370 ng/μ L i TE-buffer)

Hurtig generering af in-frame fem aminosyre-insertionsbiblioteker af ethvert protein til funktionelle analyser, hurtig og tilfældig mutagenese af klonede promotorer og andre regulatoriske DNA-regioner, tilfældig indsættelse af et NotI-restriktionsenzymsted i enhver mål-DNA-klon