Thermo Scientific™ Pierce™ Firefly Luc One-Step Glow Assay Kit

Thermo Scientific Pierce Firefly One-Step Luc Glow Assay Kit måler ildfluens luciferaseaktivitet i cellekulturer hos pattedyr ved hjælp af et enkelt trin med reagenstilsætning, hvilket gør det ideelt til højkapacitetsscreening (HTS).

Dette gløde-type luciferase-assay-kit er designet til brug med dyrkede pattedyrsceller, der transfekteres med vektorer, der udtrykker det passende ildflue-luciferase-rapporteringsenzym. Flere funktioner gør sættet særligt velegnet til luminometre uden injektorer og til højkapacitetsscreening (HTS)-applikationer. Den bekvemme, ét-trins homogene protokol minimerer håndteringstrin for at understøtte brugen af automatisering. Kombiner blot den medfølgende substratopløsning og assay-buffer for at skabe en enkelt fungerende opløsning, og tilsæt den derefter til mikropladebrønde, der indeholder de transfecterede, behandlede celler. Det stabile signaludgang (gløden) fra dette system giver fleksibilitet med hensyn til inkubationstid. Når det bruges sammen med Thermo Scientific Firefly Luc-plasmider, giver sættet et meget følsomt bioluminescerende reporter-assaysystem til påvisning af promotor- eller vejaktivitet.

Højdepunkter

• Følsom—, højt følsom detektion af ildflue-luciferaseaktivitet
• Bekvemt—ét-trins mix-and-read protokol; ingen ekstra reagenser kræves
• Stabil, —øget signalhalveringstid og stabilitet sammenlignet med flash-assays
• Simple—kræver ikke et luminometer med injektorer
• Automatiseringsvenlige—, modtagelige for højkapacitetsanalyser

Kræver

Firefly luciferase og luminometer eller andet instrument, der kan overvåge luminescens, såsom Varioskan ALF eller mikroplade-læsere Varioskan LUX

Applikationer

• Promotorstudier til analyse af cis- og trans-virkende regulatoriske elementer
• Narkotikatest
• siRNA- og miRNA-screening
• Multiplexede assays til at studere off-target effekter
• Proteinlokaliseringsrapporteringsanalyser
• Signaltransduktionsvejsanalyse

Produktdetaljer

Ildflue-luciferase er et 62 kDa-protein, der produceres i naturen af flere arter i billefamilien Lampyridae, som inkluderer slægterne Photinus og Luciola. Thermo Scientific Rød ildflue Luciferase har et emissionsområde på 560-700 nm (λmax = 613 nm). Bioluminescerende signal fra ildflue-luciferase stammer fra oxidationen af D-Luciferin. Lysudbytte, der opfanges med et luminometer, kan korreleres med mængden af ildflue-luciferaseprotein, der produceres og bruges til at bestemme aktiviteten af promotoren, der driver ildflue-luciferase-udtryk. Ildflue-luciferase-bioluminescens giver forskere en ikke-radioaktiv analyse til måling af transkriptionsaktivitet af regulatoriske elementer. Ildfluens luciferase-rapportereraktivitet kan bruges til at bestemme promotoraktivitet, til at studere aktivitet i cellen i opstrøms signalvejer eller til at bestemme effekten af aktivatorer eller hæmmere.