TaqMan™ TaqMan™ Avanceret miRNA cDNA-syntesesæt

Funktioner af TaqMan Avanceret miRNA-arbejdsgang omfatter:

•Følsomhed: høj følsomhed giver mulighed for kvantificering af lavt-udtrykkende miRNA-mål, især i biologiske væsker såsom plasma, serum og væv
•Fleksibilitet: den universelle RT-kemi genererer universelle cDNA-skabeloner for alle miRNA'er til stede i prøven, hvilket giver mulighed for fleksibilitet i studiedesign
•Eksempel på besparelser: kræver kun 2μ L plasma/serumprøve input og genererer nok cDNA til 600 qPCR-reaktioner (20μ L) eller 1200 qPCR-reaktioner (10μ L)
•Specificitet: 5’ ligeringstrin giver mulighed for enkelt basepar-diskriminering langs hele miRNA-sekvensen, inklusive vanskelige at påvise mismatches på 5’ ende
•Guldstandard TaqMan kemi: Dette sæt er designet til brug med TaqMan Avancerede miRNA-assays til qPCR, som trækker på Thermo Fisher Scientifics brancheførende bioinformatik assay design pipeline og valideringssystem for at hjælpe med at sikre høj specificitet og minimal krydsreaktivitet, selv for nært beslægtede miRNA familier.

De TaqMan Avanceret miRNA cDNA Synthesis Kit bruger 3' poly-A tailing og 5' ligering af en adaptersekvens for at forlænge de modne miRNA'er, der er til stede i prøven i hver ende før revers transkription. Universelle RT-primere genkender de universelle sekvenser, der er til stede på både de 5'- og 3'-forlængede ender af de modne miRNA'er. Alle modne miRNA'er i prøven transskriberes omvendt til cDNA.

For at forbedre detektion af lavt-udtrykkende miRNA-mål amplificeres cDNA'et derefter ved hjælp af Universal miR-Amp Primere og miR-Amp Master Mix for ensartet at øge mængden af cDNA for hvert mål, idet de relative differentielle ekspressionsniveauer opretholdes. I modsætning til traditionel præ-amplifikation genkender Universal miR-Amp-primerne de universelle sekvenser, der er tilføjet til alle modne miRNA'er på 5'- og 3'-enderne, hvilket sikrer, at der ikke er nogen amplifikationsbias.

Bemærk: den TaqMan Avanceret miRNA cDNA Synthesis Kit er ikke kompatibelt med første generation TaqMan MicroRNA-assays til qPCR. For omvendt transkription af miRNA-mål ved hjælp af miRNA-specifikke RT-primere, se venligst TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit.