Få mere at vide
Beskrivelse
Katalysér dannelsen af en phosphodiesterbinding mellem sidestillede 5'-phosphat- og 3'-hydroxyltermini i duplex-DNA eller RNA med Thermo Scientific™ T4 DNA Ligase. Enzymet reparerer enkeltstrengede hak i duplex DNA, RNA eller DNA/RNA hybrider. Det forbinder også DNA-fragmenter med enten sammenhængende eller stumpe termini, men har ingen aktivitet på enkeltstrengede nukleinsyrer.
De T4 DNA Ligase kræver ATP som en co-faktor.
Højdepunkter
- Aktiv i Themo Scientific restriktionsenzym-, PCR- og RT-buffere (når suppleret med ATP )
- Hurtig– sticky-end ligering er afsluttet på 10 minutter ved stuetemperatur
- Leveres med PEG-opløsning til effektiv ligering af stump ende
Applikationer
- Kloning af restriktionsenzym-genererede DNA-fragmenter
- Kloning af PCR-produkter
- Sammenføjning af dobbeltstrengede oligonukleotidlinkere eller adaptere til DNA
- Stedstyret mutagenese
- Amplificeret fragmentlængde polymorfi (AFLP )
- Ligase-medieret RNA-detektion ( se reference 3)
- Nick reparation i duplex DNA, RNA eller DNA/RNA hybrider
- Selvcirkularisering af lineært DNA.
Bemærk
- Indbinding af T4 DNA Ligase til DNA kan resultere i et båndskift i agarosegeler. For at undgå dette skal du inkubere prøver med 6X DNA Loading Dye& SDS-°opløsning ved 70 C i 5 minutter °eller 65 C i 10 minutter og afkøl på is før elektroforese.
- Volumenet af ligeringsreaktionsblandingen bør ikke overstige 10 % af det kompetente cellevolumen i transformationsprocessen.
- Før elektrotransformation fjernes T4 DNA Ligase fra ligeringsblandingen ved spin kolonne eller chloroform ekstraktion. Det ekstraherede DNA kan udfældes yderligere med ethanol.
Tekniske data
Tekniske data
| Koncentration | 1 U/μl |
| Enzym | DNA Ligase |
| Kompatibel buffer | 10X T4 DNA Ligase buffer |
| Mængde | 2 x 500 enheder |
| Produkttype | T4 DNA Ligase |
Sikkerhed og håndtering
- T4 DNA Ligase, LC (1 U/µL)
- Advarsel
- Alvorlige øjenskader/øjenirritation Kategori 2
- H319-Forårsager alvorlig øjenirritation.
- P264-Vask grundigt efter brug.
- P280-Bær beskyttelseshandsker/beskyttelsestøj/øjenbeskyttelse/ ansigtsbeskyttelse.
- P305+P351+P338-VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning.
- P337+P313-Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp.
- MIXTURE LIST-Contain: (R*,R*)-1,4-dimercapto-2,3-butanediol
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.