Invitrogen™ SuperScript™ IV enkeltcelle/lavt input cDNA PreAmp Kit

De Invitrogen SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit er designet til effektiv cDNA-syntese og amplifikation direkte fra intakte enkeltceller (1 1.–000) eller lave mængder af total RNA (2 pg –10 ng). Den indeholder alle nødvendige komponenter til at udføre cellelyse, revers transkription (RT) og PCR-amplifikation i et bekvemt forblandet format. En kombination af overlegne enzymer (SuperScript IV Reverse Transcriptase og platin SuperFi U DNA Polymerase) muliggør høje udbytter, følsomhed og nøjagtighed. På grund af de korte reaktionstider og minimal praktisk tid, kan denne enkle et-rørs præamplifikationsprotokol fuldføres på lidt over to timer. Det opnåede globale cDNA af høj kvalitet kan bruges til næste generations sekventering (NGS ) applikationer eller til genekspressionsanalyse ved real-time PCR.

Funktionerne i SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit inkluderer:
•Overlegen følsomhed til nem påvisning af lavt mange mål (så lavt som enkeltcelle eller 2 pg total RNA)
• Højkvalitets cDNA til transkriptionsinformation i fuld længde med ensartet dækning
• Strømlinet arbejdsgang med simpel et-rørsprotokol
• Korte lyserings- og omvendt transskriptionstider for tidsbesparelser
• Global præamplifikation kompatibel med downstream-analyse af NGS eller real-time PCR

SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit udnytter den terminale deoxynucleotidyl transferase (TdT ) aktivitet af SuperScript IV Reverse Transcriptase . Indfangende oligonukleotid indeholdende oligo(dT) og adaptersekvenser bruges som primer for selektiv førstestrengs cDNA-syntese fra poly(A)-holdige RNA'er. Når den omvendte transkriptase når 5‘ slutningen af RNA-skabelonen, TdT aktivitet tilføjer –1 3 ekstra nukleotider til cDNA-enden, hvilket muliggør skabelonskift og ligeringsfri inkorporering af adaptersekvens i 3‘ slutningen af det resulterende cDNA. SuperScript IV Reverses høje følsomhed og skabelonskifteffektivitet Transcriptase tillade indfangning af mål med lav overflod.

Adaptersekvenser inkorporeret i begge ender af cDNA'et tjener som primerbindingssteder i det efterfølgende PCR-amplifikationstrin, hvilket muliggør global præamplifikation af skabelonerne i fuld længde. Den medfølgende platin SuperFi U Preamplification Master Mix indeholder en overlegen high-fidelity DNA-polymerase, der sikrer effektiv amplifikation af lange templates (op til 10 kb) uden PCR-induceret bias eller fejl.