Invitrogen™ SuperScript™ III Første-strengsyntese SuperMix til qRT-PCR

SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix til qRT-PCR giver højtemperaturkapaciteten til SuperScript III Reverse Transcriptase i et optimeret SuperMix-format til syntese af første-strengs cDNA til brug i real-time kvantitativ RT-PCR (qRT-PCR). Den enkle, tidsbesparende reaktionsopsætning bruger kun to rør: en 2X reaktionsblanding og en enzymblanding.

Enzymblanding SuperScript III Reverse
Transcriptase , inkluderet i RT-enzymblandingen, er en version af M-MLV RT, der er blevet konstrueret til at reducere RNase H-aktivitet og give øget termisk stabilitet. Enzymet kan bruges til at syntetisere cDNA ved et temperaturområde på 42 60 –C, °hvilket giver øget specificitet, højere udbytter af cDNA og mere fuldlængde produkt end andre reverse transkriptaser. Fordi SuperScript III RT ikke hæmmes signifikant af ribosomalt og transfer-RNA, kan det bruges til at syntetisere cDNA fra totalt RNA. RNaseOUT Rekombinant ribonukleasehæmmer, også inkluderet i enzymblandingen, er et RNase-hæmmerprotein, der sikrer mod nedbrydning af mål-RNA på grund af ribonukleasekontamination af RNA-præparatet.

Reaktionsblanding 2
X RT-reaktionsblandingen inkluderer oligo(dT) ₂₀ , tilfældige hexamerer, _MgCl2 og dNTP'er i en bufferformulering, der er optimeret til qRT-PCR. E. coli RNase H leveres som et separat rør i sættet til at fjerne RNA-skabelonen fra cDNA:RNA-hybridmolekylet efter førstestrengssyntese. Dette har vist sig at øge følsomheden i qRT-PCR.

Brug af SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix
Denne SuperMix-formulering kan bruges til at kvantificere færre end 10 kopier af et målgen i qRT-PCR med et bredt dynamisk område, der understøtter nøjagtig kvantificering af højkopi-mRNA fra op til 1μ g total RNA. Reagenser leveres til 50 eller 250 RT-reaktioner på 20μ L hver.