Thermo Scientific™ SILAC Proteinkvantificeringssæt (Trypsin), RPMI 1640

Funktioner af SILAC Proteinkvantificeringssæt, RPMI 1640, inkluderer:
• Effektiv —op til 100 % etiketinkorporering i proteiner fra levende celler
• —Reproducerbar minimerer intra-eksperimentel variabilitet forårsaget af differentiel prøveforberedelse
• —Fleksible medier, der mangler både L-lysin og L-arginin, hvilket muliggør mere fuldstændig proteomdækning gennem dobbelt aminosyreisotopmærkning
• —Kompatible mærkeproteiner udtrykt i en lang række pattedyrcellelinjer tilpasset til at vokse i RPMI 1640-medium, herunder HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat og andre
• —Højkvalitets kosttilskud tunge aminosyrer med> 99% isotoprenhed; dialyseret FBS testet for at hjælpe med at sikre, at den er steril,

endotoksinfri og cellekulturkompatibel. SILAC Proteinkvantificeringssæt:
• Kvantitativ analyse af relative ændringer i proteinoverflod fra forskellige cellebehandlinger
• Kvantitativ analyse af proteiner, for hvilke der ikke findes antistoffer
• Proteinekspressionsprofilering for at studere normale vs sygdomsceller
• Identifikation og kvantificering af hundreder til tusinder af proteiner i et enkelt eksperiment

SILAC er en kraftfuld metode til at identificere og kvantificere relative differentielle ændringer i komplekse proteinprøver. Denne tilgang indebærer in vivo metabolisk inkorporering af 'tunge' ¹³ C- eller ¹⁵ N-mærkede aminosyrer i proteiner efterfulgt af massespektrometri (MS) til accelereret og omfattende identifikation, karakterisering og kvantificering af proteiner.

Fordi peptider mærket med tunge og lette aminosyrer er kemisk identiske, co-elueres de under omvendt fase kolonne præfraktionering og detekteres derfor samtidigt under MS-analyse. De relative topintensiteter af flere isotopisk adskilte peptider fra hvert protein bruges derefter til at bestemme den gennemsnitlige ændring i proteinoverflod i den behandlede prøve.

Trypsin SILAC kits leveres med ¹³ C ₆¹⁵ 13 C ₆¹⁵ N ₄ L-arginin-HCl til at mærke og kvantificere lysinholdige og argininholdige peptider fra trypsinproteinfordøjelser. Hvert sæt indeholder også 2 x 500 ml medium og dialyseret serum. Når det kombineres med Thermo Scientific protein-/peptidprøveberigelsesprodukter, SILAC Proteinkvantificeringssæt muliggør også MS-analyse af proteiner med lav overflod såsom celleoverfladeproteiner, organelspecifikke proteiner og post-translationelle proteinmodifikationer såsom phosphorylering eller glycosylering.