Thermo Scientific™ SILAC Proteinkvantificeringssæt (LysC), RPMI 1640

Thermo Scientific SILAC Proteinkvantificeringssæt– RPMI 1640 bruges til specifik analyse af proteinekspression ved massespektrometri ved brug af stabil isotopmærkning med aminosyrer i cellekultur (SILAC ).

Stabil isotopmærkning med aminosyrer i cellekultur (SILAC ) er en kraftfuld metode til at identificere og kvantificere relative differentielle ændringer i komplekse proteinprøver. Denne fremgangsmåde indebærer in vivo metabolisk inkorporering af“ tung” 13C- eller 15N-mærkede aminosyrer til proteiner efterfulgt af massespektrometri (MS) til accelereret og omfattende identifikation, karakterisering og kvantificering af proteiner.

Fordi peptider mærket med tunge og lette aminosyrer er kemisk identiske, co-elueres de under omvendt fase kolonne præfraktionering og detekteres derfor samtidigt under MS-analyse. De relative topintensiteter af flere isotopisk adskilte peptider fra hvert protein bruges derefter til at bestemme den gennemsnitlige ændring i proteinoverflod i den behandlede prøve.

Hvert kit indeholder alle nødvendige reagenser til isotopisk mærkning af celler med 13C6 L-lysin-2HCl, inklusive medier, tunge og lette aminosyrer og dialyseret serum. Tunge L-arginin-HCl-derivater (delnr. 88210, 89990) fås separat og kan kombineres med Pierce SILAC Proteinkvantificeringssæt til at forbedre dækning af peptidisotop-mærket. Kits er kompatible med pattedyrcellelinjer tilpasset til at vokse i enten DMEM eller RPMI 1640 medier. Kits med specialiserede medieformuleringer er også tilgængelige til humane og murine stamcellelinjer. Når det kombineres med Thermo Scientific Protein/peptidprøveberigelsesprodukter, Pierce SILAC Proteinkvantificeringssæt muliggør også MS-analyse af proteiner med lav overflod, såsom celleoverfladeproteiner, organelspecifikke proteiner og post-translationelle proteinmodifikationer, såsom phosphorylering eller glycosylering.

Anbefalet til: Kvantitativ analyse af relative ændringer i proteinoverflod fra forskellige cellebehandlinger; Kvantitativ analyse af proteiner, for hvilke der ikke er antistoffer tilgængelige; Proteinekspressionsprofilering af normale vs. sygdomsceller; Identifikation og kvantificering af hundreder til tusinder af proteiner i et enkelt eksperiment

• Effektiv —100 % etiketinkorporering i proteiner fra levende celler
• Reproducerbar —eliminerer intra-eksperimentel variabilitet forårsaget af differentiel prøveforberedelse
• Fleksible —medier, der mangler både L-lysin og L-arginin, hvilket muliggør mere fuldstændig proteomdækning gennem dobbelt aminosyreisotopmærkning
• Kompatible —mærkeproteiner udtrykt i en lang række pattedyrcellelinjer tilpasset til at vokse i RPMI 1640-medium, herunder HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat og andre
• Højkvalitets kosttilskud —tunge aminosyrer med> 99% isotoprenhed; dialyseret FBS testet for at sikre, at den er steril, endotoksinfri og cellekulturkompatibel