Thermo scientific™ Sekventielt protein/DNA/RNA-ekstraktionssæt

Funktioner i det sekventielle protein/DNA/RNA-ekstraktionssæt inkluderer:

• Høj følsomhed—understøtter skalerbare udtræk fra værdifulde eller lave prøvevolumen ned til 1.000 celler eller 0,005 mg væv (vævsafhængig)
• Direkte kompatible—udtrukne analytter ned til 100.000 celler eller 1-2 mg væv er valideret og egnede til massespektrometri og NGS anvendelser
• Automatiseret højkapacitetsudstyr kompatibelt med KingFisher-instrumenter—til skalerbar behandling
• Forbedret reproducerbarhedsstandardiseret—protokol reducerer variationen

Sættet anvender en perlebaseret sekventiel ekstraktionsmetode, der anvender proteinisolering før nukleinsyreekstraktion, hvilket resulterer i forbedrede proteinudbytter, der er direkte kompatible med massespektrometrianalyse. Denne tilgang gør det muligt for forskere at opnå analytter, der er egnede til forskellige downstream-applikationer, herunder SDS-PAGE, western blotting, massespektrometri, sekventering, genotypning og qPCR fra prøveinput så små som 1-2 mg væv eller 100.000 celler, samtidig med at kvalitetsstandarderne opretholdes for både næste generations sekventering (NGS) og MS-platforme. MagMAX Dynabeads magnetperlebaserede renseteknologi hjælper med at muliggøre høj reproducerbarhed og skalerbar, højkapacitetsbaseret behandling, når den integreres med automationssystemer som KingFisher Sample Purification System.

Dette kit kombinerer fordelene ved multi-analyt-ekstraktion med den præcision og effektivitet, der kræves for avancerede proteomik- og genomikarbejdsgange, hvilket gør det særligt værdifuldt til multi-omics-studier, hvor prøvekonservering og analytisk omfattende kvalitet er altafgørende.

Verificeret ydeevne

Sættet hjælper med at levere udbytte- og kvalitetsmålinger, der kan sammenlignes med standard single-analyte ekstraktionssæt, hvilket muliggør effektiv multi-analyt-genvinding fra en enkelt prøve. Mens de fleste kommercielle sekventielle protokoller er optimeret til store prøvemængder (f.eks. 1 million celler eller 10 –stykker 20 mg væv), tilbyder dette sæt enestående alsidighed på et bredere område. Valideret for 100.000 celler og 12 –mg væv er det også blevet brugt med succes med så få som 1.000 celler og 5 μg væv, samtidig med at lineære udbytter og nukleinsyreintegritet bevares egnet til qPCR-analyse. Dette brede dynamiske område giver større fleksibilitet og muliggør effektiv behandling af værdifulde eller begrænsede prøver, som er vanskelige at analysere med konventionelle metoder.

Strømlinet tretrins sekventiel udtrækning

Ekstraktionsproceduren følger en systematisk tretrinsproces, der er designet til at understøtte en høj genopretning af hver biomolekyleklasse. Indledningsvis Dynabeads introduceres proteinperler til den lyserede prøve og inkuberes for at lette proteinbinding, hvorefter de overføres til et separat rør til vask og proteinbehandling, der er kompatibelt med downstream western blot- eller massespektrometriapplikationer. Efterfølgende tilføjes MagMAX DNA/RNA-bindingsperler til det oprindelige rør, som nu er udtømt for proteiner, for at muliggøre DNA-binding og ekstraktion ved hjælp af proprietære bufferformuleringer, før det overføres til et nyt rør for videre forberedelse. Endelig introduceres MagMAX DNA/RNA-bindingsperler igen i det oprindelige rør, som nu er tømt for både proteiner og DNA, for at lette RNA-binding og ekstraktion ved hjælp af specialiserede proprietære buffere og opløsninger, med efterfølgende overførsel til et dedikeret rør til endelig forberedelse. De resulterende udtrukne proteiner er velegnede til WB- eller MS-analyse, mens det genvundne DNA og RNA er kompatible med kvantitative PCR (qPCR) og next-generation sequencing (NGS) applikationer.