Gibco™ PSC Dopaminerge Neuron Differentiering Kit

Sættet er et tretrinssystem, der bruges over 35 dage, med komponenter, der sekventielt tilføjes for at specificere PSC'er til mellemhjernens gulvplade, udvide gulvpladens stamceller og differentiere gulvpladens stamceller til funktionelle mellemhjernens dopaminerge neuroner. Hver komponent er ydelsestestet for at sikre generering af den korrekte fænotype, og de dopaminerge neuroner i mellemhjernen er blevet funktionelt testet for evnen til at producere spontant aktionspotentiale og frigivelse af dopamin ved depolarisering.

Trin 1: Specifikation af PSC'er i mellemhjernens gulvpladeceller
Under udvikling af centralnervesystemet stammer mellemhjernens dopaminerge neuroner fra en særskilt population af celler kaldet mellemhjernens gulvpladeceller, som dannes i løbet af dagene 21 28 –af svangerskabet og er placeret langs den ventrale midtlinje af det udviklende neuralrør. Nylige rapporter har fokuseret på vigtigheden af at differentiere hPSC'er til celler fra denne region i stedet for at bruge en mere generisk neurale stamcellepopulation for at skabe autentiske mellemhjerne dopaminerge neuroner. Det første trin i skabelsen af dopaminerge neuroner ved hjælp af PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit er specifikation af hPSC'er i mellemhjerne-specificerede floor plate progenitor (FP) celler i komplet Floor Plate Specification Medium.

Trin 2: Opret en bankerbar population af gulvpladeprogenitorceller Standardmetoder til
at skabe dopaminerge neuroner i mellemhjernen involverer lange protokoller, der er kontinuerlige og ikke skalerbare. Ved hjælp af PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit skabes en brugbar bank af gulvplade-progenitorceller, der opretholder midthjernens identitet.

Evnen til at banke progenitorceller i dette trin muliggør:
• En signifikant stigning i resulterende DA-neuronrenhed
• Evnen til at skalere eksperimenter ud over nuværende grænser
• Evnen til at fordele celler blandt jævnaldrende eller tø op til senere brug

Trin 3: Differentiering af gulvpladeprecursorceller til dopaminerge neuroner i mellemhjernen
Det sidste trin i PSC Dopaminergic Neuron Differentiation Kit-protokollen involverer differentiering af gulvpladeprogenitorceller til dopaminerge neuroner i mellemhjernen. Dopaminerge neuroner genereret under dette trin har vist sig at opretholde midthjernens identitet, udvise en genekspressionsprofil svarende til den for neuroner genereret ved brug af offentliggjorte protokoller og udvise funktionalitet som vist ved spontant aktionspotentiale og frigivelse af dopamin ved depolarisering.