Invitrogen™ ProcartaPlex Human JAK-STAT Pathway Panel (i alt), 6plex

Panelet er valideret til brug med cellelysater. Til fremstilling af cellelysater anbefaler vi brugen af enten ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (Kat. Nej. EPX-999999-000) eller celleekstraktionsbuffer (Cat. Nej. FNN0011) suppleret med 0,5 M EDTA og Halt Protease and Phosphatase Inhibitor engangscocktail –100X (Kat. Nr. 78440 eller 78442). Disse buffere er ikke inkluderet i panelet. Afhængigt af dit cellesystem kan andre buffere også være egnede.

Dette sæt er kompatibelt med alle Luminex instrumenter. Hvis du bruger et xMAP INTELLIFLEX DR-SE instrument, anbefaler vi vores ProcartaPlex Human JAK-STAT Pathway Dual Reporter Panel, 2x6plex (Cat. Nej. EPX060-97224-DR), som muliggør samtidig kvantificering af total- og fosforylerede proteiner på samme kugle i en enkelt brønd.

Panelet leveres i et færdigt format med individuelle hætteglas med fangst- og detektionsreagenser formuleret i 1X koncentration, hvilket kræver mindre pipettering og eksperimentel opsætning.

ProcartaPlex Forudkonfigurerede paneler testes grundigt for analyt-kombinatoribilitet, interferens og krydsreaktivitet for at give det højeste niveau af validering og præcision. Alle ProcartaPlex paneler leveres med de nødvendige reagenser til at udføre assayen.

Mål [perleområde]: STAT1 [73], STAT3 [29], STAT6 [75], JAK2 [55], FYN [78], SRC [20]

Om ProcartaPlex Assays for platformen Luminex

ProcartaPlex Immunoassays er baseret på principperne for en sandwich ELISA, hvor to meget specifikke antistoffer binder til forskellige epitoper af ét protein for at kvantificere alle proteinmål samtidig ved hjælp af et Luminex instrument. ProcartaPlex Multiplex-assays kræver så lidt som 25 μl plasma eller serum eller 50 μl cellekultur-supernatant og kun fire timer for at opnå analyserede resultater.

• Flere resultater pr. prøve—måler flere proteinmål samtidig i en enkelt 25-50 – μl prøve
• Veletableret Luminex teknologi, højt refereret multiplexingplatform—til proteindetektion og kvantificering

ProcartaPlex assays anvender Luminex xMAP (multianalyte profiling) teknologi til samtidig detektion og kvantificering af op til 80 proteinmål i en enkelt 25-50 – μl prøve fra plasma, serum, cellekultur-supernatanter og andre kropsvæsker.

Kuglerne i assayen ProcartaPlex farves internt med præcise proportioner af røde og infrarøde fluoroforer for at skabe spektralt unikke signaturer, som kan identificeres af detektionssystemerne Luminex xMAP (f.eks. Luminex 200, FLEXMAP 3D, og MAGPIX).Luminex Ligesom en sandwich ELISA ProcartaPlex bruger prøven matchede antistofpar til at identificere det protein, der er af interesse. I en multiplexet analyse mærkes hver spektralt unik kugle med antistoffer, der er specifikke for et enkelt målprotein, og bundne proteiner identificeres med biotinylerede antistoffer og streptavidin –R-fycoerytrin (RPE). Konjugationen af proteinspecifikke antistoffer til en særskilt kugle muliggør analyse af flere mål i en enkelt brønd.

Den mest markante forskel mellem en ProcartaPlex analyse og ELISA er, at fangstantistoffet i prøven ProcartaPlex er konjugeret til en perle og ikke adsorberet til mikropladebrønden, så assay-reagenserne ProcartaPlex flyder frit i opløsningen. Til detektion indeholder instrumentet Luminex 200 for eksempel to lasere, én til at skelne spektralsignaturen for hver perle og den anden til at kvantificere mængden af RPE-fluorescens, som er proportional med mængden af protein i prøven. ProcartaPlex Multiplex-assays kan profilere flere målproteiner ved at bruge betydeligt mindre prøve på samme tid, som det tager at udføre en traditionel sandwich ELISA.

ProcartaPlex Multiplexpaneler findes i flere formater på tværs af seks arter (menneske, mus, rotte, ikke-menneskelig primat, svin og hund). Besøg thermofisher.com/procartaplex for mere information, herunder en omfattende liste over individuelle proteinmål.