Invitrogen™ c-Myc Menneske ProcartaPlex™ Simplex Kit

Til fremstilling af cellelysater anbefaler vi brugen af enten ProcartaPlex Cell Lysis Buffer (Kat. Nej. EPX-999999-000) eller celleekstraktionsbuffer (Cat. Nej. FNN0011) suppleret med 0,5 M EDTA og Stop Protease og Phosphatase-hæmmer enkeltvis til brug af Cocktail 100X (Cat. Nr. 78440 eller 78442). Disse buffere er ikke inkluderet i sættet. Afhængigt af dit cellesystem kan andre buffere også være passende.

ProcartaPlex Human c-Myc Simplex Kit er en del af Human ProcartaPlex MAPK Pathway Panel (totalt) 6plex (Kat. Nej. EPX060-97017-901), som supplerer Human ProcartaPlex MAPK Pathway Panel (phospho) 6plex (Cat. Nej. EPX060-97117-PHO).

Om ProcartaPlex Assays for platformen Luminex

ProcartaPlex Immunoassays er baseret på principperne for en sandwich ELISA, hvor to meget specifikke antistoffer binder til forskellige epitoper af ét protein for at kvantificere alle proteinmål samtidig ved hjælp af et Luminex instrument. ProcartaPlex Multiplex-assays kræver så lidt som 25 μl plasma eller serum eller 50 μl cellekultur-supernatant og kun fire timer for at opnå analyserede resultater.

• Flere resultater pr. prøve - mål flere proteinmål samtidig i en enkelt prøve på 25 til 50 μl
• Veletableret Luminex teknologi – højt anerkendt multiplexingplatform til proteindetektion og kvantificering

ProcartaPlex assays benytter Luminex xMAP (multianalyte profiling) teknologi til samtidig detektion og kvantificering af op til 80 proteinmål i en enkelt 25 til 50 μl prøve fra plasma, serum, cellekultur-supernatanter og andre kropsvæsker.

Kuglerne Luminex i prøven ProcartaPlex er internt farvet med præcise proportioner af røde og infrarøde fluoroforer for at skabe spektralt unikke signaturer, som kan identificeres af detektionssystemerne xMAP Luminex (f.eks. Luminex 200, FLEXMAP 3D, og MAGPIX). Ligesom en sandwich ELISA ProcartaPlex bruger prøven matchede antistofpar til at identificere det protein, der er af interesse. I en multiplexet analyse mærkes hver spektralt unik kugle med antistoffer, der er specifikke for et enkelt målprotein, og bundne proteiner identificeres med biotinylerede antistoffer og streptavidin mod R-fycoerytrin (RPE). Konjugationen af proteinspecifikke antistoffer til en særskilt kugle muliggør analyse af flere mål i en enkelt brønd.

Den mest markante forskel mellem en ProcartaPlex analyse og ELISA er, at fangstantistoffet i prøven ProcartaPlex er konjugeret til en perle og ikke adsorberet til mikropladebrønden, så assay-reagenserne ProcartaPlex flyder frit i opløsningen. Til detektion indeholder instrumentet Luminex 200 for eksempel to lasere, én til at skelne spektralsignaturen for hver perle og den anden til at kvantificere mængden af RPE-fluorescens, som er proportional med mængden af protein i prøven. ProcartaPlex Multiplex-assays kan profilere flere målproteiner ved at bruge betydeligt mindre prøve på samme tid, som det tager at udføre en traditionel sandwich ELISA.