Invitrogen™ PrestoBlue™ og PrestoBlue™ HS-cellelevedygtighedsreagenser

Måling af ændringer i cellelevedygtighed er en grundlæggende metode til vurdering af cellesundhed, bestemmelse af genotoksicitet og evaluering af lægemidler mod kræft. Cellesundhed kan overvåges ved at detektere ændringer i flere nøgleindikatorer, herunder ændringer i plasmamembranintegritet, DNA-syntese, DNA-indhold, enzymaktivitet, tilstedeværelse af ATP og cellulært reducerende miljø.

Funktioner af PrestoBlue og PrestoBlue HS-cellelevedygtighedsreagenser inkluderer:

• Optimeret til pålidelig påvisning af pattedyrs cellelevedygtighed på kun 10 minutter
• Mål cellelevedygtighed og proliferation i forskellige celletyper, herunder pattedyr (2D og 3D), bakterier og gærceller
• Et praktisk tilføje-og-læs-format, —der ikke kræves blanding, vask eller cellelyse
• Kompatibel med enten fluorescens- eller absorbansbaserede mikropladelæsere
• Opnå højkvalitets celleproliferationsresultater med et stort dynamisk område
• Overvåg levende celler ved hjælp af realtidskinetik og fortsæt med at dyrke dem til downstream multipleksede funktionelle analyser

Hurtige 10-minutters inkubationer

Opdag pattedyrs cellelevedygtighed efter blot 10 minutters inkubation med PrestoBlue og PrestoBlue HS-cellelevedygtighedsreagenser. Disse er de eneste levedygtighedsreagenser med levende celler på markedet, der giver robuste data inden for 10 minutter efter reagenstilsætning. Alle andre resazurin-baserede cellelevedygtighedsreagenser kræver 1 –4 timers inkubation med reagenset, før data indhentes. For de bedste resultater ved brug af 3D-prøver anbefales det at inkubere prøverne i –18 24 timer før målinger.

Enestående følsomhed og nøjagtighed

PrestoBlue og PrestoBlue HS-cellelevedygtighedsreagenser kan detektere så få som 12 celler pr. brønd i en plade med 384 brønde, afhængigt af celletype og inkubationstid. Efter 10 minutters inkubation, PrestoBlue reagens kan lineært detektere celler ned til 98 celler/brønd med en Z'-værdi større end 0,5.

Forenklet analyseformat

PrestoBlue og PrestoBlue HS-cellelevedygtighedsreagenser er tilsætningsreagenser, hvilket eliminerer behovet for cellelyse eller solubiliseringstrin, der kræves af andre assays. Dette minimerer praktisk tid og forenkler processen.

Ikke-toksiske analyser af levende celler

PrestoBlue og PrestoBlue HS-cellelevedygtighedsreagenser er ikke-toksiske og kræver ikke cellelyse, hvilket tillader celler at blive inkuberet i op til 24 timer. Da der ikke kræves lysis, fortyndes PrestoBlue eller PrestoBlue HS-opløsning kan fjernes fra cellerne og erstattes med komplet vækstmedium til yderligere dyrkning og anvendelse i downstream-assays.

PrestoBlue HS-reagens —en meget oprenset version af PrestoBlue reagens med forbedret ydeevne

Alle resazurin-baserede reagenser indeholder en påviselig mængde resorufin-kontamination på grund af syntese- og fremstillingsprocessen, hvilket bidrager til høj baggrundsfluorescens og reducerer ydeevnen i cellelevedygtighedsassays. For at reducere baggrunden og forbedre ydeevnen blev der udviklet en innovativ oprensningsproces for at fjerne det forurenende resorufin, hvilket resulterer i det meget rene resazurin, der anvendes i PrestoBlue HS Cell Viability Reagens. Dette stærkt oprensede, ikke-toksiske resazurin reducerer baggrundsfluorescens ved> 50 % og øger signal-til-baggrund med> 100 % i cellelevedygtighed mikropladeanalyser.

Funktioner af PrestoBlue HS Cell Viability Reagent inkluderer:

• Fjernelse af forurenende stoffer fra resazurin, hvilket resulterer i> 50 % reduktion i baggrundsfluorescens
• Forøget signal-til-baggrundsforhold med> 100 %, hvilket giver et stort analysesignalvindue
• Tilbyder høj følsomhed med en lineær respons, der detekterer så få som 10 celler pr. brønd

Mekanisme af PrestoBlue og PrestoBlue HS reagenser

Brug af resazurin-baserede reagenser til at overvåge ændringer i cellulære reducerende miljø eller metabolisk aktivitet er en veletableret og pålidelig metode til at indikere cellelevedygtighed eller død. PrestoBlue og PrestoBlue HS-reagenser indeholder resazurin, som er en ikke-toksisk, cellegennemtrængelig forbindelse, der er blå i farven og praktisk talt ikke-fluorescerende. Når det tilføjes til celler, er det resazurin-baserede PrestoBlue og PrestoBlue HS-reagenser trænger ind i celler og modificeres af levedygtige cellers reducerende miljø. I levende celler reduceres resazurin til resorufin, en forbindelse, der er rød i farven og meget fluorescerende. Levedygtige celler omdanner kontinuerligt resazurin til resorufin, hvilket øger den samlede fluorescens af mediet, der omgiver cellerne. Omdannelsen af resazurin til resorufin resulterer også i en udtalt farveændring, hvilket gør det muligt at påvise cellelevedygtighed ved hjælp af enten absorbans- eller fluorescensbaserede pladelæsere.