Få mere at vide
Invitrogen™ Poly(A) Halelængde Assay Kit
Beskrivelse
Polyadenylering af eukaryote mRNA'er spiller en kritisk rolle i RNA-metabolisme, herunder stabilitet, forbedret translation, nuklear eksport og miRNA-medieret genregulering. Poly(A) Tail-Length Assay Kit giver dig mulighed for hurtigt at måle poly(A)-halerne af flere mRNA'er på kun tre timer. Dette sæt anvender en ny G/I-udvidelsesteknik, der bevarer 3'-enden af RNA'er og sikrer nøjagtig måling af poly(A)-halelængde. Og alle reaktionskomponenter er blevet optimeret, så du hurtigt får kvalitetsdata.
Funktioner
- Mål poly(A)-halen af flere RNA'er på under 3 timer ved hjælp af almindeligt laboratorieudstyr
- Nøjagtig måling af poly(A)-halelængde sammenlignet med andre analyser
- Et sæt indeholder alle nødvendige reagenser til 5 G/I tailing, 20 RT og 80 PCR-reaktioner
Teknologi
Poly(A) Tail-Length Assay Kit bruger fire nøgletrin til at muliggøre poly(A)-halelængdebestemmelse (se figur).
- Trin —1 poly(A)-polymerase tilføjer et begrænset antal guanosin- og inosinrester til 3'-enderne af poly(A)-holdige RNA'er.
- Trin 2 —omdannes de hale-RNA'er til DNA gennem revers transkription under anvendelse af de nyligt tilføjede G/I-haler som primingssteder.
- Trin —3 PCR-amplifikationsprodukter genereres under anvendelse af to primersæt. Et gen-specifikt frem- og omvendt primersæt designet opstrøms for polyadenyleringsstedet (f.eks. 3'-UTR) produceres som en kontrol for genet af interesse. Det andet sæt primere bruger den genspecifikke fremadrettede primer og den universelle omvendte primer, der følger med sættet, til at generere et produkt, der inkluderer poly(A)-halerne af genet af interesse.
- Trin —4 separeres PCR-produkterne på en agarose- eller polyacrylamidgel (se figur).
Udvalgte referencer
- Parker, R. og Song, H. (2004) Nat Struct Mol Biol. 11 121-127.
- Brodersen, DE et al. (2008) Biochim Biophys Acta. 1779, 532-537.
- Wu, L., Fan J. og Belasco, JG (2006) Proc Natl Acad Sci USA . 103, 4034-4039.
- Izaurralde, E. et al. (2009) RNA 15, 21-32.
- Martin, G. og Keller, W. (1998) RNA 4, 226-230.
- Gauss-Müller, V. et al. (2001) Nucleic Acids Res. 29 E57-7
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | Tilstrækkelige reagenser til 5 G/I tailing, 20 revers transkription og 80 PCR-reaktioner. HeLa Total RNA og Control Human Actin PCR Forward Primer for at verificere komponenter og protokol. Opbevar reagenser ved -°15 C til -°30 C i en ikke-frostfri fryser. Opbevar HeLa Total RNA ved -80 °C. |
| Forsendelsestilstand | Tøris |
| Polymerase | Poly(A) RNA-polymerase |
| Til brug med (applikation) | Poly(A) hale-længdedetektion |
| Udgangsmateriale | Total eukaryotisk RNA (100 ng til 2μ g) |
| Mængde | 1 sæt |
| Koncentration | 1,25 U/μ L |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Al hacer clic en Enviar, acepta que Fisher Scientific se ponga en contacto con usted en relación con los comentarios que ha proporcionado en este formulario. No compartiremos su información para ningún otro fin. Toda la información de contacto proporcionada se mantendrá de acuerdo con nuestra Política de Privacidad. Política de privacidad.