Få mere at vide
Thermo Scientific™ Poly(A) Polymerase, Gær
Beskrivelse
Poly(A) Polymerase katalyserer tilsætningen af adenosinrester til de 3'-ender af RNA. Det kan bruges til at tilføje poly(A)-haler til RNA i det første trin af kloning. Reaktionen kræver Mn2+ eller Mg2+ATP som substrat og ethvert RNA, der indeholder 3' hydroxylterminaler, som primer. Substitution af cordycepin-5'-trifosfat (3'-dATP) resulterer ATP i tilføjelsen af en enkelt 3'-dA-rest til enderne af RNA'et, en nyttig teknik til mærkning af RNA i 3'-enden.
I komparative studier virker gærpoly(A)-polymerase mere effektivt end E. coli poly(A)-polymerase til mærkning af RNA-oligonukleotider og poly(A)-tailing. Kortere inkubationstider er nødvendige for gærenzymet, og det viser sig at kunne mærke både lange og korte substrater lige godt. Poly(A) polymerase anbefales frem for T4 RNA-ligase til 3'-end mærkning af lange RNA-molekyler.
*Bemærk: Forskellige modificerede nukleotider kan også bruges til at mærke 3'-enden af RNA ved hjælp af Yeast Poly(A) Polymerase.
Renhed:
Ribonukleasefri
Lagringsbuffer:
20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM KCl, 0,5 mM DTT, 50% glycerol.
Prøvebetingelser:
2 5mM Tris-HCl (pH 7,0), 40 mM KCl, 0,5 mM MnCl2, 0,05 mM EDTA, 0,5 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 10% glycerol, 3,3 μM radiomærket ATP, 0,5 mM ATP, 6,5 μg poly(A) (∼100 baser), poly(A) polymerase. Efter inkubation ved 37 °C i 10 minutter bestemmes den syreuopløselige radioaktivitet.
Enhedsdefinition:
En enhed svarer til 15 pmol/min AMP indarbejdet i (riboA)15 ved 37 °C.
Koncentration:
600 enheder/μl
Funktionel test:
3'-endemærkning af et ribonukleotid med cordycepin-5'-trifosfat.
Funktionelt testet 5X Poly(A) polymerase-reaktionsbøder (1 ml inkluderet, PN 74226):
100 mM Tris-HCl, pH 7,0, 3,0 mM MnCl2, 0,1 mM EDTA, 1mM DTT, 500 μg/ml acetyleret BSA, 50% glycerol.
Applikationer:
- Tilføjelse af poly(A)-haler til RNA.
- Mærkning af 3'-enderne af RNA.
Kilde:
E. coli-stammen, der indeholder en overproducerende klon af Yeast Poly(A)-polymerase.
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | Sendt på tøris. Opbevares ved -20 °C. |
| Polymerase | Poly(A) RNA-polymerase |
| Mængde | 25 KU |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.