Thermo Scientific™ Massespektrometri-grade proteaser

•Enestående selektivitet —trypsin har> 95% C-terminal lysin og arginin specificitet; LysC har> 90 % C-terminal lysin-spaltningsspecificitet
•Høj renhed —ingen påviselig chymotrypsinaktivitet (trypsin)
•Komplet fordøjelses- —trypsin/LysC-enzymkombination reducerer tryptiske manglende spaltninger
•Forbedret stabilitet —trypsin kemisk modificeret til reduceret autolytisk aktivitet
•Praktiske —enzymer tilvejebragt i stabile frysetørrede eller flydende formater

Trypsinprotease er en massespektrometri (MS)-grade serinprotease afledt af svinepancreasekstrakter, der specifikt spalter på carboxylsiden af lysin- og argininrester. Enzymet er TPCK-behandlet for at eliminere chymotryptisk aktivitet og kemisk modificeret ved methylering, hvilket giver en meget aktiv og mere stabil form af enzymet. Trypsinprotease kan tolerere almindeligt anvendte delvist denaturerende forhold, såsom 0,1 % SDS, 1 M urinstof og 10 % acetonitril. Trypsin protease er mest aktiv ved pH 7 til 9 og kan reversibelt inaktiveres ved pH< 4. Trypsin kan købes frysetørret i 1 mg 5-pakninger á 20 stkμ g eller 100μ g mængder og i opløsning ved 100μ g.

Lys-C Protease er en massespektrometri (MS)-grade serinprotease isoleret fra Lysobacter enzymogenes. Lys-C-protease har høj aktivitet og specificitet for lysinrester, hvilket resulterer i større peptider og mindre prøvekompleksitet end trypsin (dvs. færre peptider). I modsætning til trypsin kan Lys-C Protease spalte lysiner efterfulgt af proliner, hvilket gør den ideel til sekventiel proteinfordøjelse efterfulgt af trypsin for at mindske manglende spaltninger. Disse unikke Lys-C Protease-egenskaber sikrer høj fordøjelseseffektivitet, når de bruges alene eller efterfulgt af tryptisk fordøjelse. Derudover har Lys-C prototypiske peptider typisk højere ladningstilstande, hvilket gør det til et valgfrit enzym til brug med ETD-fragmentering.

Lys-C-protease er almindeligt anvendt i phosphopeptidberigelsesarbejdsgange, fordi det genererer peptider med primære aminer ved både N- og C-terminalen, hvilket gør det muligt for fragmenterne at blive dobbeltmærket med aminreaktive isobariske tags. Dette resulterer i forbedret peptidionisering og forbedrede grænser for kvantificering, da flere fragmentioner kan genisoleres under MS3-opsamling. Dette enzym kan bruges til fordøjelsesarbejdsgange i opløsning eller i gel til fremstilling af peptider til LC-MS/MS-proteinidentifikation.

Effektiv proteinfordøjelse kan afsluttes på to timer ved 37 °C. Lys-C-protease forbliver aktiv under stærkt denaturerende forhold, såsom 8 M urinstof, 2 M guanidin-HCl, 1 % SDS, 2 % CHAPS og 40 % acetonitril og fungerer godt ved pH 7 9 (–maksimal aktivitet ved pH 8). Dette frysetørrede enzym har en masse på 30 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved– 20 °C. Dette Lys-C enzym er pakket frysetørret (20μ g eller 100μ g mængder).

Trypsin/Lys-C Protease Mix er en frysetørret blanding af trypsin og LysC proteaser, der er blevet optimeret til at forbedre fordøjelseseffektiviteten af proteiner. Selvom trypsin rutinemæssigt anvendes til proteinfordøjelse, er denne protease alene ikke tilstrækkelig til fuldt ud at fordøje proteiner ved carboxylenden af lysin- og argininrester. Derfor kombineres Lys-C-protease almindeligvis med trypsin for sekventielt at fordøje proteiner med færre glemte spaltninger. Trypsin/Lys-C Protease Mix leveres i fleksible formater på 20μ g, 5 x 20μ g eller 100μ g. Fordøjelsen kan afsluttes på så lidt som 1,5 –3 timer eller op til natten over, afhængigt af enzym/protein-forhold.

Chymotrypsin, GluC, Asp-N proteaser

• Øget sekvensdækning —bedre proteinkarakterisering er resultatet af overlappende peptider med komplementære kromatografiske, ioniserings- og fragmenteringsegenskaber
• Høj specifik aktivitet —hver protease har fremragende enzymatisk specificitet
• —Stabilt leveret i frysetørret format

Asp-N Protease er en MS-grade zinkmetalloproteinase afledt af en mutant stamme af Pseudomonas fragi og kræver en spormængde af zink for aktivitet. Asp-N Protease spalter primært på aminosiden af aspartat og cysteinsyre, der er et resultat af cysteinoxidation. Spaltning kan også forekomme ved glutaminsyre; dog er spaltningshastigheden ved glutamylresten signifikant lavere end spaltningshastigheden ved asparaginsyreresten. Asp-N Protease kan effektivt fordøje protein på –2 20 timer ved °37 C med aktivitet større end 20.000 enheder/mg protein og forbliver aktiv under denaturerende betingelser, såsom 1 M urinstof, 2 M ·guanidin HCl, 0,1 % SDS, 2 % CHAPS og 10 % acetonitri med optimal pHle, 6 % –aktivitet. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 27 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.

Glu-C-protease , også omtalt som V-8-protease, er en serinprotease af MS-kvalitet isoleret fra Staphylococcus aureus. Glu-C Protease spalter specifikt carboxylsiden af glutaminsyrerester i ammoniumbicarbonat- og ammoniumacetatbuffere, hvilket genererer et begrænset antal peptidfragmenter. Spaltning kan også forekomme ved både glutamin- og asparaginsyrerester i fosfatbuffere. Glu-C Protease kan effektivt fordøje protein på –5 18 timer ved °37 C med aktivitet større end 500 enheder/mg protein og forbliver aktiv under denaturerende forhold, såsom 2 M urinstof, 1 M guanidin HCl, ·0,1 % SDS, 2 % CHAPS og 20 % acetonitril. Glu-C Protease aktivitet er optimal ved pH 8. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 27 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.

Chymotrypsin Protease er en MS-grade endoproteinase isoleret fra bovin bugspytkirtel, som specifikt spalter på carboxylsiden af tyrosin, phenylalanin, tryptophan og leucin. To fremherskende former for chymotrypsinprotease, A og B, findes i lige store mængder i bovin bugspytkirtel. De er lignende proteiner (80 % homologi), men har forskellige proteolytiske egenskaber. Begge former for chymotrypsinprotease er til stede i Thermo Scientific Chymotrypsin protease. Da trypsin kan oprenses sammen med chymotrypsinprotease afledt af naturlige kilder, er Chymotrypsinprotease blevet behandlet med TLCK for at eliminere potentiel tryptisk aktivitet, hvilket forbedrer fordøjelsesspecificiteten. Chymotrypsin Protease kan tolerere milde denaturerende forhold, såsom 0,1 % SDS, 2 M urinstof, 2 M guanidin HCl, ·1 % CHAPS og 30 % acetonitril, med optimal aktivitet ved pH 7,5 8,–5. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 25 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.