Thermo Scientific™ Massespektrometri-grade proteaser

• Ekstraordinær selektivitet—har trypsin 95 >% C-terminal lysin- og argininspecificitet; LysC har >90% C-terminal lysinspaltningsspecificitet
• Høj renhed, —ingen påviselig chymotrypsinaktivitet (trypsin)
• Fuldstændig fordøjelseskombination—af trypsin/LysC-enzym reducerer tryptiske oversete kløvninger
• Forbedret stabilitet—trypsin kemisk modificeret for reduceret autolytisk aktivitet
• Bekvemme—enzymer leveret i stabile, lyofiliserede eller flydende formater

Trypsin Protease er en massespektrometri (MS)-grad serinprotease, udvundet fra svine-pancreasekstrakter, som specifikt spalter ved carboxylsiden af lysin- og argininrester. Enzymet er TPCK-behandlet for at eliminere chymotryptisk aktivitet og kemisk modificeret ved methylering, hvilket giver en meget aktiv og mere stabil form af enzymet. Trypsin Protease kan tåle almindeligt anvendte delvist denaturerende tilstande, såsom 0,1 % SDS, 1 M urinstof og 10 % acetonitril. Trypsin Protease er mest aktivt ved pH 7 til 9 og kan reversibelt inaktiveres ved pH < 4. Trypsin kan købes lyofiliseret i 1-mg 5-pakninger på 20 μg eller 100 μg og i opløsning med 100 μg.

Lys-C Protease er en massespektrometri (MS)-grad serinprotease isoleret fra Lysobacter enzymogenes. Lys-C Protease har høj aktivitet og specificitet for lysinrester, hvilket resulterer i større peptider og mindre prøvekompleksitet end trypsin (dvs. færre peptider). I modsætning til trypsin kan Lys-C Protease spalte lysiner efterfulgt af proliner, hvilket gør det ideelt til sekventiel proteinfordøjelse efterfulgt af trypsin for at mindske oversete kløvninger. Disse unikke Lys-C Protease-egenskaber sikrer høj fordøjelseseffektivitet, når de bruges alene eller efterfølges af tryptisk fordøjelse. Derudover har Lys-C prototypiske peptider typisk højere ladningstilstande, hvilket gør dem til et enzym af valg til brug ved ETD-fragmentering.

Lys-C Protease bruges ofte i fosfopeptidberigelsesworkflows, fordi det genererer peptider med primære aminer ved både N- og C-terminalen, hvilket gør det muligt at dobbeltmærke fragmenterne med amine-reaktive isobariske tags. Dette resulterer i forbedret peptidionisering og forbedrede kvantificeringsgrænser, da flere fragmentioner kan genisoleres under MS3-optagelse. Dette enzym kan bruges til in-solution eller in-gel fordøjelsesprocesser for at producere peptider til LC-MS/MS-proteinidentifikation.

Effektiv proteinfordøjelse kan gennemføres på to timer ved 37 °C. Lys-C Protease forbliver aktiv under stærkt denaturerende forhold, såsom 8 M urea, 2 M guanidin-HCl, 1% SDS, 2% CHAPS og 40% acetonitril, og fungerer godt ved pH 7 – 9 (maksimal aktivitet ved pH 8). Dette lyofiliserede enzym har en masse på 30 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved – 20 °C. Dette Lys-C-enzym er pakket lyofiliseret (20 μg eller 100 μg mængder).

Trypsin/Lys-C Protease Mix er en lyofiliseret blanding af trypsin og LysC-proteaser, som er optimeret for at forbedre fordøjelseseffektiviteten af proteiner. Selvom trypsin rutinemæssigt bruges til proteinfordøjelse, er denne protease alene ikke tilstrækkelig til fuldt ud at fordøje proteiner ved carboxylenden af lysin- og argininrester. Derfor kombineres Lys-C-protease ofte med trypsin for sekventielt at fordøje proteiner med færre manglende kløvninger. Trypsin/Lys-C Protease Mix leveres i fleksible formater på 20 μg, 5 x 20 μg eller 100 μg. Fordøjelsen kan gennemføres på så lidt som 1,5 – 3 timer eller op til natten over, afhængigt af enzym-til-protein-forholdet.

Chymotrypsin, GluC, Asp-N proteaser

• Øget sekvensdækning—giver bedre proteinkarakterisering som følge af overlappende peptider med komplementære kromatografiske, ioniserings- og fragmenteringsegenskaber
• Høj specifik aktivitet, —hver protease har fremragende enzymatisk specificitet
• Stable—leveret i et lyofiliseret format

Asp-N Protease er en MS-kvalitets zinkmetalloproteinase, der stammer fra en muteret stamme af Pseudomonas fragi og kræver en sporbar mængde zink for aktivitet. Asp-N Protease spalter primært på aminosiden af aspartat og cysteinsyre, som opstår ved oxidation af cystein. Kløvning kan også forekomme ved glutaminsyre; dog er kløvningshastigheden ved glutamylresterne signifikant lavere end kløvningshastigheden ved asparaginsyreresten. Asp-N Protease kan effektivt fordøje protein på 2 –timer og 20 timer ved 37 °C med aktivitet over 20.000 enheder/mg protein og forbliver aktiv under denatureringsbetingelser, såsom 1 M urea, 2 M guanidin·HCl, 0,1% SDS, 2% CHAPS og 10% acetonitril, med optimal aktivitet ved pH 6 – 8. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 27 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.

Glu-C Protease, også kaldet V-8 protease, er en MS-grad serinprotease isoleret fra Staphylococcus aureus. Glu-C-protesa spalter specifikt carboxylsiden af glutaminsyrerester i ammoniumbicarbonat- og ammoniumacetatbuffere og danner et begrænset antal peptidfragmenter. Kløvning kan også forekomme både ved glutaminsyre- og asparaginsyrerester i fosfatbuffere. Glu-C Protease kan effektivt fordøje protein på 5 –timer og 18 timer ved 37 °C med aktivitet over 500 enheder/mg protein og forbliver aktiv under denatureringsforhold, såsom 2 M urea, 1 M guanidin·HCl, 0,1% SDS, 2% CHAPS og 20% acetonitril. Glu-C Protease-aktivitet er optimal ved pH 8. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 27 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.

Chymotrypsin Protease er en MS-grad endoproteinase isoleret fra bovin bugspytkirtel, som specifikt kløver på carboxylsiden af tyrosin, phenylalanin, tryptofan og leucin. To dominerende former af chymotrypsinprotease, A og B, findes i lige store mængder i bovin bugspytkirtel. De er lignende proteiner (80% homologi), men har forskellige proteolytiske egenskaber. Begge former for chymotrypsinprotease findes i Thermo Scientific Chymotrypsin Protease. Da trypsin kan samrenses med chymotrypsinprotease, der stammer fra naturlige kilder, er Chymotrypsin Protease blevet behandlet med TLCK for at eliminere potentiel tryptisk aktivitet og dermed forbedre fordøjelsesspecificiteten. Chymotrypsin Protease kan tåle milde denatureringstilstande, såsom 0,1% SDS, 2 M urinstof, 2 M guanidin·HCl, 1% CHAPS og 30% acetonitril, med optimal aktivitet ved pH 7,5 – 8,5. Dette lyofiliserede enzym har en masse på 25 kDa og er stabilt i et år, når det opbevares ved -20 °C.