Thermo Scientific™ Pierce™ Kvantitative peptidanalyser& Standarder

•Følsom —detekterer nøjagtigt så lidt som 5μ g/ml (fluorometrisk) eller 25μ g/ml (kolorimetrisk) af peptidblanding
•Reproducerbar —assay ydeevne strengt testet ved brug af peptidfordøjelsesblandinger
•Robust peptidfordøjelsesstandardsæt —inkluderer en valideret peptidfordøjelsesstandard for forbedret reproducerbarhed af kvantificering
•Kompatibel —fungerer med mange reagenser, herunder MS prøveforberedende reagenser og TMT-mærkede peptider (fluorometrisk assay)
•Praktisk —let bland-og-læs format med stabilt signal, der kan læses på så lidt som 5 minutter (fluorometrisk) eller 15 minutter (kolorimetrisk)

Pierce Kvantitativ kolorimetrisk peptidanalyse giver modificeret BCA reagenser til reduktion af Cu+2 til Cu+1, en proprietær chelator optimeret til kvantificering af peptidblandinger, og peptidfordøjelsesreferencestandard til brug ved generering af lineære kontrolstandardkurver. Denne kolorimetriske peptidanalyse kræver en lille mængde prøve (20μ L) og har et arbejdspeptidkoncentrationsområde på 25 1000–μ g/ml. I reaktionen reduceres kobberet først af amidrygraden af peptider under alkaliske betingelser (Biuret-reaktion), efterfulgt af chelatorkobling med det reducerede kobber for at danne et klart rødt kompleks (absorberes ved 480 nm), der kan aflæses på så lidt som 15 minutter. Signalet produceret fra denne reaktion er –3 4 gange mere følsomt end Micro-BCA Protein Assay til peptidanalyse. Kolorimetrisk peptidanalyse er kompatibel med TMT-mærkede peptider, men anbefales ikke til syntetiske peptider, fordi analysen er påvirket af indholdet af peptidaminosyrer.

Pierce kvantitative fluorescerende peptidanalysereagenser omfatter peptidassaybuffer, fluorescerende peptidmærkningsreagens og en peptidfordøjelsesanalysestandard til kvantitativ måling af peptidkoncentrationer. Denne følsomme analyse kræver kun 10μ L af prøven, producerer en lineær respons med stigende peptidkoncentrationer (5 –1000μ g/mL), og resulterer i en stabil endelig fluorescens, der kan detekteres på så lidt som 5 minutter. I dette assay mærkes peptider specifikt ved aminoterminalen under anvendelse af et aminreaktivt fluorescerende reagens, som er ikke-fluorescerende, indtil det reagerer med tryptiske peptider. De fluorescensmærkede peptider detekteres på en mikropladelæser (ex390/em475). Dette assay er velegnet til kvantitativ måling af peptidfordøjelsesblandinger og syntetiske peptider med en ublokeret aminoterminal. Fluorescerende assays er ikke kompatible med TMT-mærkede peptider.

Thermo Scientific Peptide Digest Assay Standard blev designet som en referencestandard til brug med Pierce kvantitative fluorometriske og kolorimetriske peptidassays for at forbedre reproducerbarheden og nøjagtigheden af peptidkvantificeringen. Peptidfordøjelsesanalysestandarden leveres i flydende format, der er klar til brug med 1 mg/ml. Referenceproteinet er blevet fordøjet med MS-grade trypsin for at minimere manglende spaltninger. For at sikre ensartet ydeevne overvåges fordøjelseseffektiviteten af proteinet for at sikre ensartethed fra parti til parti, og kvaliteten vurderes ved sammenligning med en referencestandard.

Ansøgninger
• Normalisering af prøvekoncentrationer til kvantitative downstream-applikationer
• Normalisering af prøvebelastningsvolumener til LC-, MS- og LC/MS-applikationer
• Måling af restitution efter peptidoprydningsprocedurer