Thermo Scientific™ Pierce™ Kolorimetrisk proteaseanalysesæt

Disse kolorimetriske og fluorescerende protease-assay kits omfatter to forskellige metoder til måling af total proteaseaktivitet i biologiske prøver. Begge sæt kan bruges til at vurdere fremskridt i protease-rensningsprocedurer eller til at kvantificere proteaseforurening i proteinprøver. Kitsene bruger succinyleret eller fluorescein-mærket kasein som proteasesubstrat. Proteolyse af substratet resulterer i peptider, hvis aminogrupper eller ændrede fluorescensegenskaber muliggør detektion i de respektive kits. Protease-aktivitet kvantificeres ved sammenligning med trypsinstandarden, der er inkluderet i hvert sæt.

Højdepunkter:

• Kaseinsubstrater – måler aktiviteten af enhver protease, der spalter kasein i peptidfragmenter
• Trypsin-standarden – kvantificerer proteaseaktivitet i forhold til trypsin, en universelt accepteret reference
• Følsom, – 1000 gange mere følsom end assays, der bruger uændrede former for kasein
• Enkle og hurtige – reagensglas- og mikropladeprotokoller gennemføres på under en time
• Kun homogene – additionstrin; ingen separation, overførsel eller stop trin kræves
• Tilpasser – nemt tid, temperatur og pH for at optimere følsomheden for de relevante proteaser

Colorimetric Protease Assay Kit (Del nr. 23263) bruger fuldt succinyleret kasein som substrat til analysen. Hydrolyse af dette substrat i nærvær af protease resulterer i frigivelse af peptidfragmenter med frie aminoterminale grupper. Disse peptider reageres med trinitrobenzensulfonsyre (TNBSA), efterfulgt af måling af absorptionsforøgelsen, der opstår ved dannelsen af gule TNB-peptidaddukter.

• Substrat: succinyleret kasein (ikke tilgængelig separat)
• Grundlag for assay: påvisning af primære aminer som følge af proteolyse
• Detektionsreagens: trinitrobenzensulfonsyre (TNBSA)
• Måling: absorption ved 450 nm (pladelæser eller spektrofotometer)

Fluorescerende Protease Assay Kit (Del nr. 23266) inkluderer fluoresceinmærket kasein som substrat til vurdering af proteaseaktivitet i en prøve ved enten fluorescensresonansenergioverførsel (FRET) med et standard fluorometer eller fluorescenspolarisation (FP) med kompetent instrumentering. FTC-Casein er native casein, der er mærket med et stort molart overskud af fluorescein isothiocyanat (FITC). Fluorescensegenskaberne ved dette stærkt mærkede, intakte proteinsubstrat ændrer sig dramatisk ved fordøjelse af proteaser, hvilket resulterer i en målbar indikation af proteolyse.

• Substrat: fluoresceinmærket kasein (FITC-kasein); tilgængelig separat som Del nr. 23267
• Grundlaget for prøven: ændring i fluorescensresonans (FRET) eller fluorescenspolarisation (FP)
• Måling: instrument med fluorescein-excitations- og emissionsfiltre (485/538nm)

Inkluderer:

Modificeret kasein, trypsin standard og Tris-bufferet saltvand (begge sæt); TNBSA-løsning (kun Del nr. 23263)

Anbefalet til:

Vurder funktionel integritet og den overordnede fremgang i proteaserensningen; Kvantificere proteaseforurening i proteinprøver; Karakteriser aktiviteten af usædvanlige proteaser sammenlignet med trypsin; Evaluer bufferbetingelser for deres indvirkning på proteasefunktion og aktivitet