Thermo Scientific™ Pierce™ Monomer avidinagarose

Pierce Monomeric Avidin Kit og harpikser er unikke blandt biotin-bindende understøtninger ved at tillade ikke-denaturerende affinitetsoprensning af biotinylerede molekyler. Det immobiliserede monomere avidinprotein binder biotin med høj specificitet og moderat affinitet, hvilket tillader ikke-biotin-molekyler at blive vasket væk og derefter de bundne biotin-mærkede molekyler at blive kompetitivt elueret ved hjælp af 2 mM biotin i phosphatbufret saltvand (PBS). Denne teknik giver de mest skånsomme elueringsbetingelser for biotinyleret proteinoprensning og undgår forurening og andre problemer forbundet med traditionelle avidin- og streptavidinmetoder. Den monomere avidinsøjle kan derefter regenereres ved at anvende 0,1 M glycin til at strippe søjlen for resterende bundet biotin uden at miste evnen til at binde en anden biotinyleret prøve.

Med typisk avidin eller streptavidin er biotinbindingsaffiniteten (Kd ≤sup>10-15 M) så stor, at oprensning med disse traditionelle medier kræver denaturerende betingelser for eluering, såsom 8M Guanidin ·HCl ved pH 1,5 eller kogning i reducerende SDS-PAGE-prøvebelastningsbuffer. Ud over deres negative virkninger på det biotinylerede protein af interesse forårsager sådanne hårde elueringsbetingelser typisk, at fremmede proteiner (dvs. avidin- eller streptavidin-underenhederne) strippes fra harpiksen og co-elueres med det ønskede oprensningsprodukt. I modsætning hertil, når avidin kobles til en harpiks (f.eks. tværbundet perleformet agarose eller UltraLink Resin) som underenhedsmonomeren bibeholdes dens specificitet for biotin, men dens biotinbindingsaffinitet falder til et niveau (Kd ≤sup>10-8 M ), der er befordrende for efterfølgende eluering.

Højdepunkter:

• Ikke-denaturerende– renser biotinylerede produkter ved hjælp af milde elueringsbetingelser (2mM fri biotin)

• Genanvendelig– Monomerisk avidinagarose kan regenereres og genbruges mindst 10 gange, med kun et marginalt tab i biotinbindingskapacitet (ca. 2,5 % fald pr. regenerering)

• Bestemt– bevarer biotin-bindingsspecificitet og lav uspecifik binding af nativt avidin

• Fleksibel– binder prøver i en række fysiologiske buffere og eluerer enten med 0,1 M glycin eller ved konkurrence med 2 mM biotin

• God bindeevne– mere end 1,2 mg biotinyleret BSA/ml harpiks

• Bekvem– køb selvstændig agarose eller UltraLink™ Harpikser eller et komplet oprensningskit med færdigpakket kolonne og buffere

Varespecifikke funktioner:

• Agaroseharpikser og kit er baseret på tværbundet 4% perleformet agarose
• UltraLink Harpiks er en akrylamidstøtte (UltraLink Biostøtte)

Inkluderer:

Sættet indeholder en færdigpakket kolonne af monomer avidinagarose og bindings- og elueringsbuffere.