Thermo Scientific™ Immobiliseret papain (agaroseharpiks)

Papain er en uspecifik, cystein-endopeptidase isoleret fra papaya latex, der bruges i en lang række anvendelser. Når IgG-molekyler inkuberes med papain i nærvær af cystein, opdeles en eller flere peptidbindinger i hængselregionen, hvilket producerer tre fragmenter af lignende størrelse: to Fab-fragmenter og et Fc-fragment. Fc-fragmenterne kan adskilles fra Fab-fragmenterne under anvendelse af immobiliseret protein A eller ved ionbytterkromatografi. 50 kilodalton Fc-fragmentet bruges ofte til at bestemme specificiteten af Fc-receptorerne uden interferens fra antigenbinding. Fab-fragmenter er nyttige i immunhistokemiske undersøgelser, fordi fragmenterne trænger bedre ind i vævet end intakt IgG. Ikke-specifik binding fra Fc-receptorer undgås også ved kun at anvende Fab-delen af immunoglobulinet. Papain kan også bruges til at generere F(ab')2-fragmenter. For at fremstille F(ab')2-fragmenter aktiveres papainen først med 10 mM cystein, som derefter fjernes via gelfiltrering. Hvis der ikke er noget cystein til stede under papainfordøjelsen, kan der dannes F(ab')2-fragmenter. Disse fragmenter er ofte inkonsekvente, og reproducerbarhed er et problem. Immobiliseret papain kan erstattes af fri papain i næsten enhver anvendelse, og det er fordelagtigt, fordi det praktisk talt eliminerer autolyse, eliminerer kontaminering af en prøve med proteasen og tillader kontrol af fordøjelsen ved at fjerne papain eller kontrollere strømmen af prøve over en immobiliseret papain-søjle. Immobiliseret papain er også mere stabilt mod varmeinduceret denaturering, hvilket resulterer i længere vedligeholdelse af aktivitet.

Højdepunkter:

• Støtte: Tværbundet 6% perleformet agarose
• Specifik aktivitet: 16-40 BAEE-enheder/ml papain før påfyldning
• Påfyldning: 250 μg papain/ml gel
• Form: Opslæmning i 50 % glycerol, 0,1 M Na-acetat, pH 4,4, 0,05 % natriumazid

Yderligere funktioner:

• Alternativt navn: Papaya peptidase I
• Spalter noget uspecifikt ved udsatte rester
• Kilde: Carica papaya latex Molekylvægt: 23.000
• Proteasetype: Cysteinprotease
• Til antistoffragmentering spaltes til Fab- eller F(ab')2-fragmenter
• Reaktionsbetingelser pH 6 til 7, 20 til 37 °C
• Inhibitorer: tungmetaller, carbonyler, NEM, p-chlormercuro-benzoat, E-64