Thermo Scientific™ Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit

De Thermo Scientific Pierce Gaussia Luciferase Glow Assay Kit giver et følsomt bioluminescenssystem til at bestemme ekspression af et gen af interesse med en luciferase-reporter. Det ekstremt lyse og stabile bioluminescenssignal (halveringstid på mere end 1 time) produceres i nærværelse af Gaussia-Dura luciferasereporteren på grund af oxidation af luciferasesubstratet coelenterazin (figur 1). Gaussia luciferase er et 20 kDa protein fra den marine copepod, Gaussia princeps, som har større proteinstabilitet og signallysstyrke end ildflue og naturlig Renilla luciferase. Det bioluminescerende enzym udskilles i høj grad i cellekulturmediet, hvilket muliggør levende celleovervågning af reporteraktivitet. Lysoutput genereret af luciferasereaktionen kan korreleres til mængden af Gaussia luciferaseprotein produceret og brugt til at bestemme aktiviteten af promotoren, der driver Gaussia-ekspression.

Funktioner af Gaussia Luciferase Glow Assay Kit:
•Sensitiv —højfølsom påvisning af Gaussia luciferase aktivitet
•Stabil —øget signalstabilitet
•Simple kræver —ikke et luminometer med injektorer
•Kompatible assay-—reagenser, der er kompatible med andre Gaussia-luciferaser
•Automationsvenlig —modtagelig for assays med høj kapacitet
•Praktisk —indeholder en universel cellelysebuffer og optimeret glødassay-reagens
•Safe —giver mulighed for at udføre ikke-radioaktive assays

Når det bruges med Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc Vectors, kittet giver et ekstremt følsomt bioluminescens reporter-assaysystem til påvisning af udskilt eller intracellulær luciferaseaktivitet fra promotor- eller pathway-aktivering med udvidet signalstabilitet. Lysoutput genereret af luciferasereaktionen (emissionsmaksimum på 485 nm) indikerer, at Gaussia luciferase blev transskriberet. Denne lysemission kan korreleres med mængden af produceret luciferaseprotein, som igen er proportional med aktiviteten af promotoren for Gaussia-luciferaseekspression og indikerer, at den regulatoriske region af målgenet var aktiv. Denne reaktion kræver ikke adenosintrifosfat (ATP ) eller andre cofaktorer. Sættet inkluderer cellelysebuffer, reaktionsbuffer og substrat og kan bruges til at påvise aktiviteten af alle Gaussia luciferaser eller derivater, der bruger coelenterazin som et substrat.

Gaussia Luciferase Glow Assay Kit kræver:
Gaussia luciferase og luminometer eller andet instrument, der er i stand til at overvåge luminescens, som f.eks. Thermo Scientific Varioskan LUX Mikropladelæsere.

Anvendelser af Gaussia Luciferase Glow Assay Kit:
•Promotorundersøgelser til analyse af cis-regulatoriske elementer og trans-virkende faktorer
• Narkotikascreening
• siRNA og miRNA screening
• Multipleksede assays til undersøgelse af effekter uden for mål
• Sekretorisk pathway/protein lokalisering reporter assays
• Analyse af signaltransduktionsveje
• RNA-splejsningsundersøgelser

Gaussia-Dura-genet brugt i Thermo Scientific Gaussia-Dura Luc Vectors er afledt af vildtype Gaussia-genet og giver lige så lyst, men mere stabilt lysoutput. Gaussia Glow Assay Kit-reagenset giver en Gaussia-Dura luciferasereaktion med kinetik af lystype, der giver en lavere intensitet, men længere varighed, hvilket giver mulighed for højere prøvegennemløb. Denne glød-type assay med et forlænget luminescenssignal kræver ikke reagensinjektorer og anbefales til luminometre uden injektorer eller til applikationer, der kræver batchbehandling af prøver.