Thermo Scientific™ Pierce™ Dilution-Free™ Hurtigt guld BCA Protein Assay

Funktionerne Dilution-Free i Rapid Gold BCA Protein Assay Kit inkluderer:

• Fortyndingsfri – eliminerer behovet for prøve- og standardkurvefortyndinger og reducerer opsætningstiden med op til 80 %
• Kort prøvetid – fem minutter, stuetemperatur reaktion
• Bredt analyseområde – og lineært arbejdsområde for BSA på 20 til 10.000 μg/ml
• Uniform – udviser lignende protein-til-protein variation som traditionel BCA proteinassay og mindre protein-til-protein variation end farvebindende proteinassay-metoder (Bradford)
• Kompatible – upåvirket af typiske koncentrationer af de fleste ioniske og ikke-ioniske detergenter
• Kolorimetrisk – optimal absorption ved 480 nm
• Nøjagtig – 2X mere præcis end Bradford-assays

Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit bruger samme kobberkelateringsteknologi som den velkendte traditionelle proteinanalyse Pierce BCA og giver sammenlignelig nøjagtighed, men med fem minutters inkubation ved stuetemperatur og målt ved 480 nm. Denne forbedring eliminerer behovet for at udføre serieelle eller prøvefortyndinger, gennemgå en lang inkubationsperiode eller udsætte prøverne for forhøjede temperaturer, hvilket giver hurtigere tid til resultater.

Den traditionelle BCA proteinanalyse er en bredt anvendt og accepteret proteinanalyse, betroet for sin meget præcise bestemmelse af proteinkoncentration og kompatibilitet med de fleste prøvetyper, der forekommer i proteinforskning. For at udvikle prøverne i denne traditionelle protokol skal man dog enten opvarme reaktionen ved 37 °C i 30 minutter eller tillade udvikling ved stuetemperatur i to timer. Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay bevarer de vigtigste egenskaber fra den traditionelle BCA analyse, men tillader en hurtig tid og rumtemperaturinkubation svarende til farvebindingsmetoder.

Dilution-Free Rapid Gold BCA Assay kan bruges til at vurdere udbytter i hele cellelysater og affinitetskolonnefraktioner samt til at overvåge proteinforurening i industrielle anvendelser. Ligesom den traditionelle BCA assay Dilution-Free påvirkes Rapid Gold BCA Assay langt mindre end farvebindingsmetoder af forskelle i proteinsammensætning, hvilket giver lav variation mellem protein og protein.

Hvordan Rapid Gold BCA Protein Assay opdager Dilution-Free protein
Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay bruger samme kobberreduktionsmetode som den traditionelle BCA proteinassay med en unik kobberkelator. Testen kombinerer den velkendte reduktion af Cu2+ til Cu1+ med protein i et alkalisk medium med den meget følsomme og selektive kolorimetriske detektion af kopper-kationen (Cu1+) med den proprietære chelator. Det første trin er kelation af kobber med protein i et alkalisk miljø for at danne et lysegrønt kompleks. I denne reaktion, kendt som biuret-reaktionen, danner peptider med tre eller flere aminosyrerester et farvet chelatkompleks med kuperioner i et alkalisk miljø med natriumkaliumtarrat.

I det andet trin af farveudviklingsreaktionen reagerer Rapid Gold-chelatoren Dilution-Free BCA med den reducerede (koperholdige) kation, der blev dannet i trin et. Det intense guldfarvede reaktionsprodukt opstår ved kelation af to molekyler af BCA med én koperion. BCA/kobber-komplekset er vandopløseligt og udviser en stærk lineær absorption ved 480 nm med stigende proteinkoncentrationer. Komplekset er cirka 100 gange mere følsomt (nedre detektionsgrænse) end den lysegrønne farve på den første reaktion.

Reaktionen, der fører til farvedannelsen, påvirkes stærkt af fire aminosyrerester (cystein, cystin, tyrosin og tryptofan) i aminosyresekvensen i proteinet. Men i modsætning til Coomassie farvebindingsmetoderne (dvs. Bradford) bidrager den universelle peptidrygsøjle også til farvedannelsen og hjælper med at minimere variation forårsaget af forskelle i proteinsammensætning.

Kompatibilitet af Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay
Visse stoffer er kendt for at forstyrre Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay, herunder dem med reduktionspotentiale, kelaterende midler og stærke syrer eller baser. Da de er kendt for at forstyrre proteinestimering ved selv små koncentrationer, bør følgende stoffer undgå som komponenter i prøvebufferen:

• Ascorbinsyre
• EGTA
• Jern
• Uren sukrose
• Katekolaminer
• Uren glycerol
• Lipider
• Tryptofan
• Kreatinin
• Brintoverilte
• Melibiose
• Tyrosin
• Cystein
• Hydrazider
• Phenolrød
• Urinsyre
• TCEP
• Thimerosal
• 2-mercaptoethanol

Pierce Dilution-Free Tubestrip-holder
Pierce Dilution-Free Tubestrip Holder er et genanvendelig skumstativ til brug med Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards og er inkluderet i 20 ml prøvestørrelsen af Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay Kit. Den kan også købes separat. Proteinstandardkoncentrationer er trykt på Tubestrip Holder for nem reference og pipettering på bordpladen.