Thermo Scientific™ Pierce™ Dilution-Free™ Hurtigt guld BCA Protein Assay

Pierce Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay Kit er et ubesværet, hurtigt og præcist assay, der er optimeret til at bestemme den samlede proteinkoncentration. Det er vaskemiddelkompatibelt og har et 5X bredere dynamisk område end traditionelle proteinanalyser på 0,02 10 –mg/ml. Dette brede dynamiske område eliminerer behovet for at fortynde de fleste prøver for at få dem inden for analysens rækkevidde.

Derudover Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay leveres med et sæt af syv forfortyndede BSA-proteinstandarder pakket i en flerkanals pipettevenlig tubestrip, så der kræves ingen serielle fortyndinger. Rørstrimlen inkluderer et enkelt tomt rør, der gør det muligt for brugere at tilføje deres egen prøvebuffer med henblik på blank subtraktion. De Dilution-Free Slangeholder (kat. nr. A57184) muliggør nem håndtering på bænken.

Funktioner af Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay Kit inkluderer:

• Fortyndingsfri —eliminerer behovet for prøve- og standardkurvefortyndinger, hvilket reducerer opsætningstiden med op til 80 %
• Kort analysetid —fem minutter, stuetemperatur reaktion
• Bredt analyseområde —lineært arbejdsområde for BSA på 20 til 10.000μ g/ml
• Uniform —udviser lignende protein-til-protein variation som traditionel BCA Proteinanalyse og mindre protein-til-protein variation end farvebindende proteinanalysemetoder (Bradford)
• Kompatibel —upåvirket af typiske koncentrationer af de fleste ioniske og ikke-ioniske detergenter
• Kolorimetrisk —optimal absorbans ved 480 nm
• Nøjagtig —2X mere nøjagtig end Bradford-assays

Pierce Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay Kit bruger den samme kobberchelaterende teknologi som den velkendte traditionelle Pierce BCA Protein Assay og giver sammenlignelig nøjagtighed, men med en fem-minutters inkubation ved stuetemperatur og målt ved 480 nm. Denne forbedring eliminerer behovet for at udføre serie- eller prøvefortyndinger, udholde en lang inkubationsperiode eller udsætte prøverne for forhøjede temperaturer, hvilket giver hurtigere resultater.

Det traditionelle BCA Protein Assay er en udbredt og accepteret proteinanalyse, som er betroet for sin meget nøjagtige proteinkoncentrationsbestemmelse og kompatibilitet med de fleste prøvetyper, man støder på i proteinforskning. Men for at udvikle prøverne i denne traditionelle protokol skal man enten opvarme reaktionen ved 37 C °i 30 minutter eller tillade udvikling i stuetemperatur i to timer. De Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay bevarer nøgleegenskaberne for den traditionelle BCA assay, men tillader en hurtig inkubation i tid og stuetemperatur svarende til farvebindingsmetoder.

De Dilution-Free Hurtigt guld BCA Assay kan bruges til at vurdere udbytter i helcellelysater og affinitetssøjlefraktioner samt til at overvåge proteinkontamination i industrielle applikationer. Svarende til den traditionelle BCA assay, den Dilution-Free Hurtigt guld BCA Assay påvirkes meget mindre end farvebindingsmetoder af proteinsammensætningsforskelle, hvilket giver lav protein-til-protein variation.

Hvordan Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay detekterer protein

De Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay bruger den samme kobberreduktionsmetode som den traditionelle BCA Proteinanalyse med en unik kobberchelator. Analysen kombinerer den velkendte reduktion af Cu2+ til Cu1+ med protein i et alkalisk medium med den meget følsomme og selektive kolorimetriske påvisning af kobber(II)-kationen (Cu1+) af den proprietære chelator. Det første trin er cheleringen af kobber med protein i et alkalisk miljø for at danne et lysegrønt kompleks. I denne reaktion, kendt som biuretreaktionen, danner peptider indeholdende tre eller flere aminosyrerester et farvet chelatkompleks med kobber(II)ioner i et alkalisk miljø indeholdende natriumkaliumtartrat.

I det andet trin af farveudviklingsreaktionen Dilution-Free Hurtigt guld BCA chelator reagerer med den reducerede (cupro) kation, der blev dannet i trin et. Det intense guldfarvede reaktionsprodukt er resultatet af chelateringen af to molekyler af BCA med en kobber-ion. BCA/kobber-komplekset er vandopløseligt og udviser en stærk lineær absorbans ved 480 nm med stigende proteinkoncentrationer. Komplekset er ca. 100 gange mere følsomt (nedre grænse for detektion) end den lysegrønne farve af den første reaktion.

Reaktionen, der fører til farvedannelsen, er stærkt påvirket af fire aminosyrerester (cystein, cystin, tyrosin og tryptophan) i proteinets aminosyresekvens. Men i modsætning til Coomassie farvebindende metoder (dvs. Bradford), bidrager den universelle peptidrygrad også til farvedannelse, og hjælper med at minimere variabilitet forårsaget af proteinsammensætningsforskelle.

Kompatibilitet af Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay

Visse stoffer vides at interferere med Dilution-Free Hurtigt guld BCA Proteinanalyse, inklusive dem med reducerende potentiale, chelateringsmidler og stærke syrer eller baser. Fordi de er kendt for at interferere med proteinestimering ved lige små koncentrationer, skal du undgå følgende stoffer som komponenter i prøvebufferen:

• Ascorbinsyre
• EGTA
• Jern
• Uren saccharose
• Katekolaminer
• Uren glycerol
• Lipider
• Tryptofan
• Kreatinin
• Hydrogenperoxid
• Melibiose
• Tyrosin
• Cystein
• Hydrazider
• Fenol rød
• Urinsyre
• TCEP
• Thimerosal
• 2-mercaptoethanol

Gennembore Dilution-Free Rørbåndsholder

Pierce Dilution-Free Tubestrip Holder er et genanvendeligt skumstativ til brug med Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards og er inkluderet i 20 ml prøvestørrelsen af Pierce Dilution-Free Hurtigt guld BCA Protein Assay Kit. Den er også tilgængelig til salg separat. Proteinstandardkoncentrationer er trykt på tubestripholderen for nem reference og pipettering på bordpladen.