Thermo Scientific™ Pierce™ Crosslink IP Kit

Pierce Crosslink IP Kit-metoden involverer indfangning af IP-antistoffet mod Protein A/G Agarose-harpiks og kovalent immobilisering af det til underlaget ved tværbinding med disuccinmidylsuberat (DSS). Antistofharpiksen inkuberes derefter med prøven, der indeholder proteinantigenet af interesse, hvilket tillader antistof:antigen-komplekset at dannes. Efter vask for at fjerne ikke-bundne (formodentlig uønskede) komponenter af prøven, genvindes antigenet ved dissociation fra antistoffet med elueringsbuffer leveret i sættet. Hele proceduren udføres i en mikrocentrifuge-spinkop, hvilket tillader opløsninger at blive fuldstændigt adskilt fra agaroseharpiksen ved kort centrifugering. Kun antigen elueres ved proceduren, hvilket gør det muligt at identificere og analysere det yderligere uden interferens fra antistoffragmenter. Desuden kan antistofharpiksen ofte genbruges til yderligere runder af immunpræcipitation.

Højdepunkter:

• Eliminerer antistofkontamination– antistof er irreversibelt bundet til agaroseperlerne, således at co-eluering af tunge og lette kæder med det oprensede protein minimeres

• Nem og effektiv skalerbarhed– brug kun den mængde antistof, der er nødvendig for et enkelt IP-eksperiment (f.μeks. 5 g) eller immobiliser μop til 200 g antistof for at forberede en større mængde færdiglavet IP-affinitetsharpiks til mange eksperimenter

• Assays pålidelighed og prøvehåndtering– Pierce Spin Columns eliminerer harpikstab og sørger for mere effektiv adskillelse af løsninger end traditionelle IP-metoder, der kun bruger mikrocentrifugerør

• Forberedt antistofaffinitetsharpiks kan genbruges– fordi antistoffet er kovalent immobiliseret og normalt ikke inaktiveres ved den milde elueringsprocedure, kan harpiksen ofte bruges flere gange

• Komplet sæt– Pakken indeholder tilstrækkelige reagenser og spin-søjler til at udføre mindst 50 antistofimmobiliseringer og IP-eksperimenter

Inkluderer:

Pierce Protein A/G Plus Agarose, kontrolagaroseharpiks, DSS-tværbinder, koblingsbuffer, IP-lyse/vaskebuffer, konditioneringsbuffer, Tris-bufret saltvand, elueringsbuffer, prøvepåfyldningsbuffer, spinsøjler og opsamlingsrør

Anbefalet til:

Immunpræcipitation efterfulgt af elektroforese og excision af proteinet til massespektrometri eller sekventeringsidentifikationsanalyse; Immunpræcipitation og SDS-PAGE-analyse af et målprotein, hvis molekylvægt svarer til det tunge eller lette kæde-antistoffragment; Immunpræcipitation af målproteiner til efterfølgende analyse ved ikke-denaturerende metoder (dvs. metoder, der ikke involverer SDS-PAGE)