Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Strålende blå farvestoffer

Coomassie R-250 og G-250 farvestoffer er to kemiske former af en disulfoneret triphenylmethanforbindelse, som almindeligvis bruges som grundlag for farvninger til detektion af proteiner i gelelektroforese og Bradford-type assay-reagenser til proteinkvantificering. R-250 (rødtonede) formen mangler to methylgrupper, som findes i G-250 (grøntonede) formen, som også kaldes kolloidal coomassie-farvestof.

Typisk formuleres coomassie gel-farvninger og proteinassay-reagenser som meget sure opløsninger i 25 til 50% methanol. Under sure forhold binder farvestoffet sig primært til proteiner gennem basiske aminosyrer (primært arginin, lysin og histidin), og antallet af koomassie-farvestofligander, der binder til hvert proteinmolekyle, er omtrent proportionalt med antallet af positive ladninger fundet på proteinet. Proteinbinding får farvestoffet til at ændre sig fra rødbrunt til klart blåt (absorptionsmaksimum er 595 nm).

Funktioner inkluderer:

• Let påvisning—udvikler intenst farvede komplekser med proteiner
• Høj følsomhed—kan bestemme så lidt som 0,5 μg/cm^² protein i en gelmatrix
• Reversibel farvningsanion—af Coomassie Brilliant Blue-farvestof, dannet i det sure farvningsmedium, kombineres med de protonerede aminogrupper af proteiner ved elektrostatisk interaktion; det resulterende kompleks er reversibelt under korrekte forhold
• Differentiering mellem bundet og ubundet farvestof—, når det er opløst i en 0,01 M citratbuffer ved pH 3,0, har en absorptionsmaksimum ved 555 nm; protein-farvestofkomplekset er kendetegnet ved en top, der er lidt bredere end den for frit farvestof, med et maksimum på 549 nm