Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Strålende blå farvestoffer

Coomassie R-250- og G-250-farvestoffer er to kemiske former af en disulfoneret triphenylmethanforbindelse, der almindeligvis anvendes som grundlag for pletter til påvisning af proteiner i gelelektroforese og Bradford-type assayreagenser til proteinkvantificering. R-250 (rødfarvet) form mangler to methylgrupper, der er til stede i G-250 (grønfarvet) form, som også kaldes kolloid coomassie farvestof.

Typisk formuleres coomassie gel pletter og protein assay reagenser som meget sure opløsninger i 25 til 50 % methanol. Under sure forhold binder farvestoffet sig til proteiner primært gennem basiske aminosyrer (primært arginin, lysin og histidin), og antallet af coomassie-farveligander bundet til hvert proteinmolekyle er omtrent proportionalt med antallet af positive ladninger, der findes på proteinet. Proteinbinding får farvestoffet til at skifte fra rødbrunt til lyseblåt (absorptionsmaksimum er lig med 595 nm).

Funktionerne omfatter:
• Nem påvisning —udvikler intenst farvede komplekser med proteiner
•Høj følsomhed —kan bestemme så lidt som 0,5μ g/cm² protein til stede i en gelmatrix
•Reversibel farvning —anion af Coomassie Brilliant Blue farvestof dannet i det sure farvningsmedium kombineres med de protonerede aminogrupper i proteiner ved elektrostatisk interaktion; resulterende kompleks er reversibelt under passende forhold
•Differentiering mellem bundet og ubundet farvestof, når —det er opløst i 0,01 M citratbuffer ved pH 3,0, har et absorptionsmaksimum ved 555 nm; protein-farve kompleks er kendetegnet ved en top lidt bredere end den for frit farvestof med et maksimum ved 549 nm