Thermo Scientific™ Pierce™ Chromogenic Endotoxin Quant Kit

Endotoksin er et lipopolysaccharid (LPS), der udgør en stor del af cellevæggens ydre membran i gramnegative bakterier. LPS er det mest udbredte antigen på celleoverfladen af de fleste gram-negative bakterier. De Thermo Scientific Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit er et meget følsomt endepunktsassay, der nøjagtigt måler og detekterer endotoksin i et protein, peptid, nukleinsyre (DNA eller RNA), vaccine eller antistofprøve ved hjælp af amebocytlysatanalysen. Limulus amebocytlysat (LAL) bruges i vid udstrækning som et simpelt og følsomt assay til påvisning af endotoksiner.

Funktioner og fordele ved Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit inkluderer:
•Meget følsom med et bredt —område detekterer så lidt som 0,01 EU/mL til 1 EU/mL
• —Specifik ingen interferens fraß -glucaner og egnet til en bred vifte af prøver, herunder plasma, protein, vaccine, plasmid eller nukleinsyrer (DNA og RNA)
• —Udfør hurtigt assay på så lidt som 20 minutter

Thermo Scientific Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit er et meget følsomt endepunktsassay, der bruger Limulus amebocytlysater (LAL) afledt af hesteskokrabbens blod (Limulus polyphemus) til nøjagtigt at måle og detektere endotoksiner. Endotoksiner kan findes i en plasma-, protein-, peptid-, nukleinsyre- eller antistofprøve. Disse Chromogenic Endotoxin Quant Kits muliggør detektion inden for brede følsomhedsintervaller på 0,01 til 1,0 EU/mL* ved brug af et standard spektrofotometer eller pladelæser ved –405 410 nm. Vores fleksible sæt giver dig mulighed for at analysere prøver i et lavt område på 0,–01 0,1 EU/mL eller i et højt område på 0,–1 1,0 EU/mL, afhængigt af dine forskningsbehov.

Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit bruger amebocytlysatmetoden, som måler interaktionen af endotoksinet med proenzymet Faktor C, der findes i cirkulerende amebocytter fra hesteskokrabben. Den proteolytiske aktivitet af dette proenzym aktiveres i nærvær af LPS. Endotoksinniveauer bestemmes ved at måle aktiviteten af faktor C i nærvær af det farveløse kromogene syntetiske peptidsubstrat (Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA), der frigiver p-nitroanilin (pNA) efter proteolyse, hvilket producerer en gul farve, der kan måles ved en absorbans på 405m. Den udviklede farveintensitet er direkte proportional med mængden af endotoksin til stede i prøven og beregnes ved hjælp af en standardkurve for en kendt mængde endotoksin. Denne analyse er blevet industristandarden for endotoksindetektion i lægemidler, medicinsk udstyr, mad- og vandtestning samt biovidenskab og medicinsk forskning.

Sammenslutning af endotoksin og sygdom
Endotoksiner frigives i deres omgivende miljø, når gram-negative bakterier gennemgår normal celledeling eller i store koncentrationer, når de beskadiges eller gennemgår cellelyse. Da endotoksiner er pyrogene (fremkalder feber) hos pattedyr, er identifikation og overvågning af endotoksinniveauer ekstremt vigtigt på mange områder, herunder undersøgelse af mikrobiomet for at vurdere perifert immunrespons af specifik sygdom. Endotoksiner er blevet forbundet med ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD), meningokoksygdom og forskellige typer sepsis. Endotoksiner kan være problematiske hos forbrændingspatienter på grund af translokation af endogene bakterier og tab af væske, hvilket resulterer i GI-relateret sygdom såsom tarmiskæmi eller tarmskade. Sværhedsgraden af symptomer på sygdomme som Crohns ’sygdom, colitis ulcerosa og cystisk fibrose er også blevet forbundet med mængden af LPS i tarmen.

Specificitet af Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kits
Når de måles med Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit, bestemmes endotoksinniveauer i prøver nøjagtigt ved hjælp af den medfølgende endotoksinstandard med kendt koncentration, der er afledt af E.coli-stamme O111: B4. Det lave følsomhedsinterval i denne analyse tillader højere fortynding af prøver, der er begrænset i mængde eller indeholder forstyrrende stoffer, hvilket hjælper med at undgå potentielle falske negative eller falske positive i endotoksinkvantificering. Denne analyse er også kompatibel med (1,3)-β -D-glucan, en cellevægskomponent af bakterier og svampe. β-glucaner er ikke pyrogene, men kan aktivere faktor G og udløse koagulationskaskaden, hvilket producerer falske positiver i amebocytlysatanalysen. β-glucanblokkere er ikke påkrævet til denne analyse og i prøver, der indeholder≤ 10 ng/ml (1,3)-β -D-glucan, ingen forbedring er udstillet. Se venligst tabel 1 i datafigurer for mere information om testede reagenser og interaktioner.

Vigtigheden af endotoksintestning
Selvom endotoksiner ikke er infektiøse organismer, er de giftige og kan udløse endotoksisk shock, inflammation eller sepsis i dyr og vævskulturer. Da disse forbindelser er varmestabile og kan overleve steriliseringsprocedurer, er identifikation af endotoksinkontamination ekstremt vigtig. Følsom endotoksintestning er også afgørende i biovidenskab og medicinsk forskning på grund af de lave endotoksinniveauer, der kræves til cellekultur og in vivo dyreforskning.

Eliminering og testning af endotoksiner er også nødvendig i prøver fremstillet af gramnegative bakterier før celletransfektion eller dyreinjektion. Det er vigtigt at bestemme endotoksinniveauer for at vurdere effektiviteten af metoder til fjernelse af endotoksin og forhindre endotoksisk shock, inflammation og/eller sepsis i vævskulturceller og dyr, der er injiceret med endotoksin-kontaminerede proteiner.

*En endotoksinenhed/ml (EU/ml) svarer til ca. 0,1 ng endotoksin/ml opløsning.

Relaterede produkter:
Pierce™ Harpiks til fjernelse af endotoksin med høj kapacitet (kat.nr. 88270)
Pierce™ Endotoksinfjernelsessøjler med høj kapacitet (Kat.nr. 88274)