Thermo Scientific™ Pierce™ Bradford Plus Protein Assay Kits

Pierce Bradford Plus Protein Assay Kit er et klar til brug, reduktionsmiddel-kompatibelt, forbedret Bradford assay reagens, der bruges til hurtigt at måle den samlede proteinkoncentration sammenlignet med en proteinstandard. Det giver øget linearitet og halvdelen af protein-til-protein-variabiliteten af andre kommercielle Bradford-assayformuleringer.

Sættets muligheder inkluderer Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, som er et sæt af syv forfortyndede BSA-standarder, pakket i en flerkanals pipettevenlig tubestrip. Rørstrimlen inkluderer et enkelt tomt rør, der gør det muligt for brugere at tilføje deres egen prøvebuffer med henblik på blank subtraktion.

Funktionerne i Pierce Bradford Plus Protein Assay Kit inkluderer:

• Kolorimetrisk —måling med et standard spektrofotometer eller pladelæser ved 595 nm
• Enkelt at bruge —enkelt reagens; der kræves ingen arbejdsreagensforberedelse
• Hurtig —næsten øjeblikkelig farveudvikling; tilføje, blande og læse resultater
• Bredt analyseområde —detekterer proteinkoncentrationer i området 1 til 1500μ g/ml
• Lineær —forbedret linearitet og responsens ensartethed sammenlignet med traditionelle Bradford-formuleringer
• Fleksible —mikroplade- og kuvetteprotokoller leveres og kan tilpasses flere målarbejdsområder
• Valgmuligheder for –seriefortyndingsfrit —udvalg inkluderer Dilution-Free BSA-proteinstandarder, der eliminerer behovet for at udføre serielle fortyndinger, når der genereres en standardkurve

Assayet udføres ved stuetemperatur. Tilsæt blot prøven til reagensglasset eller brønden, og den resulterende blå farve måles ved 595 nm efter en kort inkubation ved stuetemperatur. Proteinassayet er kompatibelt med de fleste salte, opløsningsmidler, buffere, thioler, reducerende stoffer og metalchelaterende midler, som findes i proteinprøver. Analysen kan udføres i enten reagensglas eller mikropladeformat.

Hvordan Bradford Plus Assay detekterer protein

Brug af Coomassie G-250 farvestof i et kolorimetrisk reagens til påvisning og kvantificering af totalt protein blev først beskrevet af Dr. Marion Bradford i 1976. I det sure miljø af reagenset binder protein sig til Coomassie farvestof. Dette resulterer i et spektralskifte fra den rødlige/brune form af farvestoffet (absorbansmaksimum ved 465 nm) til den blå form af farvestoffet (absorbansmaksimum ved 610 nm). Forskellen mellem de to former for farvestoffet er størst ved 595 nm, så det er den optimale bølgelængde til at måle den blå farve fra Coomassie farvestof-protein kompleks. Hvis det ønskes, kan den blå farve måles ved enhver bølgelængde mellem 575 nm og 615 nm. Ved de to yderpunkter (575 nm og 615 nm) er der et tab på omkring 10 % i den målte mængde farve (absorbans) sammenlignet med den opnåede ved 595 nm.

Udvikling af farve i Coomassie farvestofbaserede (Bradford) proteinassays er blevet forbundet med tilstedeværelsen af visse basiske aminosyrer (primært arginin, lysin og histidin) i proteinet. Van der Waals-kræfter og hydrofobe interaktioner deltager også i bindingen af farvestoffet med protein. Antallet af Coomassie farvestofligander bundet til hvert proteinmolekyle er omtrent proportional med antallet af positive ladninger fundet på proteinet. Frie aminosyrer, peptider og lavmolekylære proteiner producerer ikke farve med Coomassie farvestofreagenser. Generelt skal massen af et peptid eller protein være mindst 3000 Dalton for at blive analyseret med dette reagens.