Thermo Scientific™ Pierce™ BCA Protein Assay Kits

Pierce BCA Protein Assay Kit er et højpræcisions, detergentkompatibelt proteinassay til bestemmelse af proteinkoncentration. Gennembore BCA reagenser giver nøjagtig bestemmelse af proteinkoncentrationen med de fleste prøvetyper, man støder på i proteinforskning. Pierce BCA Assay kan bruges til at vurdere udbytter i helcellelysater, affinitetssøjlefraktioner, oprensede proteinprøver samt til at overvåge proteinkontamination i industrielle applikationer. Sammenlignet med de fleste farvebindingsmetoder er BCA assay påvirkes meget mindre af proteinsammensætningsforskelle, hvilket giver større koncentrationsnøjagtighed.

Der er mulighed for sæt, der inkluderer Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards, som er et sæt af syv forfortyndede BSA-standarder, pakket i en flerkanals pipettevenlig tubestrip. Rørstrimlen inkluderer et enkelt tomt rør, der gør det muligt for brugere at tilføje deres egen prøvebuffer med henblik på blank subtraktion.

Funktioner af BCA Protein Assay Kit inkluderer:

• Kolorimetrisk —estimat visuelt eller mål med et standard spektrofotometer eller pladelæser ved 562 nm
• Accurate —udviser halvdelen af protein-til-protein-variationen observeret med farvebindingsmetoder (Bradford)
• Kompatibel —upåvirket af typiske koncentrationer af de fleste ioniske og ikke-ioniske detergenter
• Kort analysetid —30 min inkubation; meget nemmere og fire gange hurtigere end klassiske Lowry-metoder
• Bredt analyseområde —lineært arbejdsområde for BSA på 20 til 2000μ g/ml
• Følsom —detektion ned til 5μ g/mL med forbedret protokol
• Der er ikke flere muligheder for seriefortyndingskit— Dilution-Free BSA-proteinstandarder, som eliminerer behovet for at udføre serielle fortyndinger, når der genereres en standardkurve

Hvordan analysen fungerer

De BCA Protein Assay kombinerer den velkendte reduktion af Cu ²⁺ til Cu ¹⁺ med protein i et alkalisk medium med den meget følsomme og selektive kolorimetriske detektion af cupro-kationen (Cu ¹⁺ ) med bicinchoninsyre (BCA ). Det første trin er cheleringen af kobber med protein i et alkalisk miljø for at danne et lyseblåt kompleks. I denne reaktion, kendt som biuretreaktionen, danner peptider indeholdende tre eller flere aminosyrerester et farvet chelatkompleks med kobber(II)ioner i et alkalisk miljø indeholdende natriumkaliumtartrat.

I det andet trin af farveudviklingsreaktionen, BCA reagerer med den reducerede (kobber)kation, der blev dannet i trin et. Det intense lilla-farvede reaktionsprodukt er et resultat af chelateringen af to molekyler af BCA med en kobber-ion. BCA/kobber-komplekset er vandopløseligt og udviser en stærk lineær absorbans ved 562 nm med stigende proteinkoncentrationer. Komplekset er ca. 100 gange mere følsomt (nedre grænse for detektion) end den lyseblå farve af den første reaktion.

Reaktionen er stærkt påvirket af fire aminosyrerester (cystein, cystin, tyrosin og tryptophan) i proteinets aminosyresekvens. Dog i modsætning til Coomassie farvebindende metoder (dvs. Bradford), bidrager den universelle peptidrygrad også til farvedannelse og hjælper med at minimere variabilitet forårsaget af proteinsammensætningsforskelle.