Thermo Scientific™ Pierce™ Anti-c-Myc Agarose

Thermo Scientific Pierce Anti-c-Myc Agarose er en immunpræcipitationsharpiks med høj affinitet, der er ideel til oprensning af rekombinante c-Myc-mærkede proteiner udtrykt i humane in vitro-ekspressionssystemer og bakterielle og pattedyrcellelysater.

Anti-c-Myc-antistoffet, der anvendes til fremstilling af Pierce Anti-c-Myc Agarose, er et meget specifikt muse-IgG1 monoklonalt antistof (klon 9E10), der genkender c-Myc-epitopmærket (EQKLISEEDL) afledt af det humane c-myc-onkogen (p62 c-myc). Underlaget er tværbundet 4% perleformet agarose. Denne anti-c-Myc affinitetsharpiks kan pakkes i tyngdekraftsrensningskolonner, spinrensningskolonner eller patroner til FPLC instrumenter til at oprense c-Myc-fusionsproteiner udtrykt i bakterie- eller pattedyrceller.

• Bestemt – meget specifikt anti-c-Myc monoklonalt antistof (klon 9E10) muliggør højt udbytte og høj renhed til immunpræcipitation
• Skalerbar – tilgængelig i 2 og 10 ml harpikspakningsstørrelser for at muliggøre oprensninger eller immunfældninger i større skala
• Alsidig – kan bruges i spin- eller gravitationssøjler såvel som i FPLC patroner
• Bekvem – reagenser til eluering og påvisning af c-Myc-mærkede fusionsproteiner er tilgængelige separat

• Oprensning af c-Myc-fusionsproteiner udtrykt i Pierce Human In Vitro Translation Kits
• Oprensning i stor skala af rekombinante c-Myc-mærkede proteiner
• High-throughput berigelse af fusionsproteiner og interagerende partnere
• IP og co-IP eksperimenter (som med Pierce c-Myc-Tag IP/co-IP Kit)

Pierce Anti-c-Myc Agarose består af et meget specifikt monoklonalt anti-c-Myc-antistof, der er kovalent immobiliseret på en tværbundet 4% perleformet agarosebærer. Produktet leveres som en 25% gylle. Ved inkubation med en prøve fanges c-Myc-mærket fusionsprotein på agaroseperlerne. Efter enkle vasketrin elueres det mærkede protein let fra harpiksen ved hjælp af 0,1 M glycin (pH 2,0-2,8), 3M NaSCN eller 50 mM NaOH afhængigt af nedstrømspåføringen af det oprensede protein. Til eluering af højfunktionelle proteiner kan Pierce c-Myc-peptid også bruges til at eluere det c-Myc-mærkede protein. Anti-c-Myc-antistof kan anvendes til at påvise tilstedeværelsen af det mærkede protein ved Western blot.

I eksperimenter med et c-Myc-mærket fusionsprotein (26 til 29 kDa) tilvejebragte harpiksen en bindingskapacitet på 102 til 144 nmol protein pr. ml bundfældet harpiks. Elueringskapaciteten var mindst 18 til 19 nmol pr. ml bundfældet harpiks under anvendelse af 0,1 M glycin, pH 2,8. Bindings- og elueringskapaciteten vil variere afhængigt af c-Myc-fusionsproteinet og elueringsmetoden.