Invitrogen™ Digitonin (5 %)

Digitonin, også kendt som digitin, er et mildt, ikke-ionisk detergent med en kolesterollignende struktur, der gør det muligt at vandopløselige lipider. Det er nyttigt til permeabiliserende celler og kan bruges som positiv kontrol mod cytotoksicitetskemi. Derudover bevarer det det naturlige lipidmiljø i membranproteinkomplekser og kan bruges til at opløselige membranbundne proteiner. Digitonin har en molekylformel på C₅₆H₉₂O₂₉ og en molekylvægt på 1229 Dalton.

Digitonin vaskemiddelopløsning har mange flere anvendelser. Det bruges til at forberede native proteinprøver til analyse på NativePAGE Gel System. Inkluderet i prøveforberedelsessættet NativePAGE (Kat. nr. BN2008), forbedrer denne færdige detergentopløsning opløseligheden af hydrofobe og membranproteiner under prøveforberedelse. Prøver forberedt med 10% DDM, 5% digitonin eller NativePAGE Sample Prep Kit er kompatible med NativePAGE Novex Bis-Tris Gels til native elektroforese og har øget opløsning og reduceret striber. Derudover kan digitonin før strukturel bestemmelse ved kryo-EM eller krystallisering bruges til at opløselige membranproteiner (typisk ved 12 –% w/v) og som en vaskebuffer.

Det er vigtigt at bemærke ved prøveforberedelse, at digitonin-vaskemiddelets micellestørrelse er ∼70 kDa og typisk anvendes ved en koncentration, der er 12 –gange den kritiske micellekoncentration (CMC).

Desuden kan digitonin bruges som et spike i renset protein ved CMC-koncentration for at hjælpe med partikelfordeling og foretrukken orientering på gitteret under vitrificeringsprocessen. Derudover giver digitonin effektiv antistofpenetration i vævssektioner og er kompatibel med immunhistokemisk (IHC) farvning. Digitonin ved en endelig koncentration på 0,2 –0,5% i buffer er kompatibelt med IHC.

BEMÆRK: Hvis 5% digitoninopløsningen udfældes uden for opløsningen, opvarm opløsningen ved 95 °C i 5 minutter og lav derefter vortex for at opløse udfældningen. Køl til stuetemperatur før brug.