Invitrogen™ mTOR[pS2448] Menneske ProcartaPlex™ Simplex sæt

Til fremstilling af cellelysater anbefaler vi brug af enten ProcartaPlex Cellelysebuffer (kat. nr. EPX-999999-900) eller celleekstraktionsbuffer (kat. nr. FNN0011) suppleret med 0,5 M EDTA og Halt-protease- og fosfataseinhibitor engangscocktail (–100X) (kat. nr. 78440 eller 7). Disse buffere er ikke inkluderet i panelet. Afhængigt af dit cellesystem kan andre buffere også være egnede.

Om ProcartaPlex Assays for Luminex Platform

ProcartaPlex immunoassays er baseret på principperne for en sandwich ELISA ved at bruge to meget specifikke antistoffer, der binder til forskellige epitoper af ét protein til at kvantificere alle proteinmål samtidigt ved hjælp af en Luminex instrument. ProcartaPlex multiplex assays kræver så lidt som 25μ L plasma eller serum eller 50μ L cellekultursupernatant og kun fire timer for at opnå analyserede resultater.

• Flere resultater pr. prøve —måler flere proteinmål samtidigt i en enkelt 25 50–μ L prøve
• Veletableret Luminex teknologi —højt refereret multipleksing platform til protein detektion og kvantificering

ProcartaPlex analyser anvender Luminex xMAP (multianalyt profilering) teknologi til samtidig detektion og kvantificering af op til 80 proteinmål i en –enkelt 25 50μ L-prøve fra plasma, serum, cellekultursupernatant, cellelysat og andre kropsvæsker.

De Luminex perler i ProcartaPlex analysen er internt farvet med præcise proportioner af røde og infrarøde fluoroforer for at skabe spektralt unikke signaturer, der kan identificeres af Luminex xMAP detektionssystemer (f.eks. Luminex 200 , FLEXMAP 3D , xMAP INTELLIFLEX, xMAP INTELLIFLEX DR-SE, og MAGPIX ). Svarende til en sandwich ELISA , den ProcartaPlex assay bruger matchede antistofpar til at identificere proteinet af interesse. I et multiplekset assay mærkes hver spektralt unik perle med antistoffer, der er specifikke for et enkelt målprotein, og bundne proteiner identificeres med biotinylerede antistoffer og streptavidin R-–phycoerythrin (RPE). Konjugationen af proteinspecifikke antistoffer til en særskilt perle giver mulighed for analyse af flere mål i en enkelt brønd.

Hertil kommer xMAP INTELLIFLEX DR-SE-systemet tilbyder dobbelt-rapporter-funktion, der tillader måling af en anden parameter af analytten, og har sideudskubningsfunktioner for øget fleksibilitet og automatisering. Sammen med ProcartaPlex signalanalyser, den xMAP INTELLIFLEX DR-SE instrument muliggør kvantificering og multipleksing af phosphorylerede og totale proteiner i samme brønd, på samme Luminex perle og i samme analysekørsel.

Den væsentligste forskel mellem en ProcartaPlex assay og ELISA er, at indfangningsantistoffet i ProcartaPlex assay er konjugeret til en perle og ikke adsorberet til mikropladebrønden, så den ProcartaPlex assay reagenser er frit svævende i opløsningen. Til detektering Luminex 200 instrument, for eksempel, indeholder to lasere, en til at skelne den spektrale signatur af hver perle og den anden til at kvantificere mængden af RPE-fluorescens, som er proportional med mængden af protein til stede i prøven. ProcartaPlex multiplex assays kan profilere flere målproteiner ved at bruge væsentligt mindre prøve på samme tid, som det tager at udføre en traditionel sandwich ELISA .