Invitrogen™ Monomeriske cyanin-nukleinsyrepletter

Disse fem spektralt distinkte monomere cyanin-nukleinsyrefarvninger er højfølsomme fluorescerende prober til nukleinsyrefarvning. Carbocyaninmonomererne har meget stærk bindingsaffinitet for dsDNA med dissociationskonstanter i det mikromolære område. Disse farvestoffer omfatter hver et enkelt cyaninfarvestof og en kationisk sidekæde. Carbocyaninmonomererne er spektralt analoge med de tilsvarende dimere cyaninfarvestoffer; dog med kun to positive ladninger og én interkalerende enhed udviser disse farvestoffer noget reduceret affinitet for nukleinsyrer i forhold til cyanindimererne.

Funktioner af de monomere cyanin-nukleinsyrefarvninger:
• Høj affinitet —stærk bindingsaffinitet for dsDNA med dissociationskonstanter i det mikromolære område
•Lav baggrundsbesværlig —fluorescens, når den ikke er bundet til nukleinsyrer
•Stor fluorescensforstærkning —20- til 1800-fold fluorescensforbedring ved binding til DNA
•Lys fluorescens —høje ekstinktionskoefficienter og fluorescenskvanteudbytter, hvilket resulterer i meget lyse fluorescenssignaler

Ligesom deres dimere modstykker er disse monomere cyaninfarvestoffer typisk uigennemtrængelige for levedygtige celler og kan bruges som døde celleindikatorer, selvom YO-PRO-1 (kat.nr. Y3603) kan være gennemtrængende for apoptotiske celler, hvilket giver en bekvem indikator for apoptose. De monomere cyaninfarver har bred anvendelighed på grund af deres lave baggrund og lyse fluorescens. Anvendelser omfatter farvning af nukleinsyrer på faste understøtninger, forfarvning af prøver til gel- eller kapillarelektroforese, påvisning af levedygtighed og modfarvning i eksperimenter med flere mærker.

Fluorescensspektrene for de fem monomere cyanin-nukleinsyrefarvninger dækker hele det synlige bølgelængdeområde, og hvert farvestof adskiller sig i ekstinktionskoefficient og kvanteudbytte. Disse farvestoffer kan også anvendes med ultraviolette trans- eller epi-illuminator-excitationskilder. TO-PRO-1, PO-PRO-1 og YO-PRO-1 farvestoffer udviser sekundære ultraviolette excitationstoppe nær 275 nm. De monomere cyanin-nukleinsyrefarvninger udviser store grader af fluorescensforøgelse ved binding til DNA (eller RNA), varierende fra 400 til 1800 gange for“ 1-serie” og 20 til 200 gange for“ 3-serie.” Følgelig er fluorescensen af ubundet farvestof ubetydelig under de fleste eksperimentelle detektionsbetingelser.

De monomere cyanin-nukleinsyrefarvninger leveres i en enhedsstørrelse på 1 ml som 1 mM opløsninger i dimethylsulfoxid (DMSO).

PO-PRO™ -1 jodid (435/455)
Den blå-fluorescerende PO-PRO-1-farvning har excitations-/emissionsmaksima∼ 435/455 nm, når den er bundet til nukleinsyre. Det kan exciteres af ultraviolette (UV) excitationskilder og He-Cd 442 nm laser.

YO-PRO™ -1 jodid (491/509)
Den grøn-fluorescerende YO-PRO-1-farve har excitations-/emissionsmaksima∼ 491/509 nm, når den er bundet til nukleinsyre. Det kan exciteres af ultraviolette (UV) excitationskilder og Ar 488 nm laser. YO-PRO-1-farvning er blevet brugt til at identificere apoptotiske celler. Apoptotiske celler bliver gennemtrængelige for YO-PRO-1, men forbliver uigennemtrængelige for propidiumiodid (kat. nr. P3566) og andre døde cellefarvninger. Levende celler farves ikke med YO-PRO-1, hvilket gør det muligt at bruge dem i efterfølgende eksperimenter. YO-PRO-1 nukleinsyrefarven er også inkluderet som en apoptoseindikator i Vybrant Apoptosis Assay Kit #4 (Kat. Nr. V13243) og Chromatin Condensation/Membran Permeability/Døde Cell Apoptosis Kit (Kat. Nr. V23201).

TIL-PRO™ -1 jodid (515/531)
Den grøn-fluorescerende TO-PRO-1-farve har excitations-/emissionsmaksima∼ 515/531 nm, når den er bundet til nukleinsyre. Det kan exciteres af ultraviolette (UV) excitationskilder og Ar 514 nm laser.

YO-PRO™ -3 jodid (612/631)
Den orange-fluorescerende YO-PRO-3-farve har excitations-/emissionsmaksima∼ 612/631 nm, når den er bundet til nukleinsyre. Det kan exciteres af He-Ne 594 nm laser.

TIL-PRO™ -3 jodid (642/661)
Den langt røde fluorescerende TO-PRO-3-farve har excitations-/emissionsmaksima∼ 642/661 nm med fluorescens svarende til Alexa Fluor 647 eller Cy5 farvestoffer. Langbølgelængdefluorescensen af TO-PRO-3-farven er godt adskilt fra den af almindeligt anvendte fluoroforer, som f.eks. Alexa Fluor farvestoffer, Oregon Green, fluorescein (FITC), rhodamin (TRITC), Texas Red, cumarin (AMCA), Marina Blue og Pacific Blue farvestoffer. Derudover har langbølgelængde –lysabsorberende farvestoffer såsom TO-PRO-3-farve den fordel, at deres fluorescens sædvanligvis ikke skjules af autofluorescensen af væv.

TO-PRO-3-farvning er nyttig som en nuklear modfarvning og døde celleindikator i fluorescensmikroskopi og flowcytometri og er blandt de højest følsomme prober til nukleinsyredetektion. TO-PRO-3 giver stærk og selektiv farvning af kernen i dyrkede celler og i paraffinsnit. Samtidig mærkning med en grøn-fluorescerende SYTO farvestof og celleimpermeant TO-PRO-3-farvning bruges ofte til at vurdere cellelevedygtighed. TO-PRO-3 har en meget højere ekstinktionskoefficient end DNA-bundet propidiumiodid og er blevet brugt til unikke applikationer såsom påvisning af mikrobielle celler og mikroorganismer i jordmiljøer.

TO-PRO-3 fås også som stuetemperaturstabile, brugsklare løsninger:
• NucRed™ Død 647 ReadyProbes™ Reagens (kat.nr. R37113)
• TO-PRO™ 3 Klar Flow™ Reagens (kat.nr. R37170)