Invitrogen™ Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 Proteinsyntese Assay Kit

De Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 Protein Synthesis Assay Kit giver en hurtig, følsom og ikke-radioaktiv metode til påvisning af proteinsyntese ved hjælp af fluorescensmikroskopi eller billeddannelse med højt indhold. I denne analyse er O-propargyl-puromycin (OPP) effektivt inkorporeret i nyligt oversatte proteiner i komplette methioninholdige medier og fluorescerende mærket med en lys, fotostabil Alexa Fluor™ farvestof i en hurtig, meget specifik og mild klikreaktion.

Sættets funktioner inkluderer:

• Ingen medieskift påkrævet —fungerer i komplette, methioninholdige medier, ingen grund til at fjerne cellemedier
• Multiplex-—aktiveret Click-iT™ Plus-teknologi bevarer signal fra GFP og binding af fluorescerende-konjugerede phalloidiner
• Ikke-—radioaktivt et alternativ til de traditionelle ³⁵ S-methionin metoder
• Works in vivo —publicerede resultater viser brug in vivo til bestemmelse af

proteintranslation Sættet indeholder O-propargyl-puromycin (OPP), som er en alkynanalog af puromycin (kan også fås separat), samt Alexa Fluor™ 647 picolylazid og alle nødvendige reagenser til at udføre klikreaktionen. OPP fodres til dyrkede celler og inkorporeres i proteiner under aktiv proteinsyntese. Tilføjelse af Alexa Fluor™ 647 picolylazid og Click-reaktionsreagenserne fører til en kemoselektiv ligering, eller 'klik'-reaktion, mellem picolylazidfarvestoffet og OPP-alkynen, hvilket gør det muligt at detektere de modificerede proteiner ved billedbaseret analyse.

Klikreaktionen bruger bioortogonale (biologisk unikke) dele til at fluorescerende mærke prolifererende celler, hvilket hjælper med at producere lav baggrund og høj detektionsfølsomhed. På grund af de milde reaktionsforhold, Click-iT™ Plus-assays detekterer proteintranslationshændelser, mens de muliggør bevarelse af cellemorfologi, binding af fluorescensmærket phalloidin og det fluorescerende signal fra GFP.

I modsætning til ^35S -methionin, der anvendes i traditionelle metoder, er OPP ikke en aminosyreanalog, så den kan tilsættes direkte til celler i komplette medier eller bruges til at bestemme proteinsyntese in vivo .

Sættet indeholder alle de komponenter, der er nødvendige for at mærke og detektere den inkorporerede OPP i nyligt translaterede proteiner i prøver af adhærente celler. Sættet indeholder tilstrækkelige reagenser til mærkning af 25 18 mmx 18 mm dækglas med 1 ml reaktionsbuffer pr. test.