Invitrogen™ PFB-FDGlu (5-(Pentafluorbenzoylamino)fluorescein di-β -D-Glucopyranosid)

PFB-FDGlu er cellegennemtrængeligt og når det indlæses i celler, lokaliseres det til endosomale og lysosomale rum, samtidig med at cellernes levedygtighed bevares. Ved enzymatisk spaltning med aktive GCase-enzymer giver det et grønt-fluorescerende farvestof (PFB-F) med excitations-/emissionsmaksima på ca. 492/516 nm. Denne fluorescens kan påvises ved hjælp af fluorescensmikroskopi, billeddannelse med højt indhold og flowcytometri, hvilket muliggør specifik enkeltcelleanalyse af GCase-aktivitet.

Fordele ved PFB-FDGlu til påvisning af GCase-aktivitet i lysosomer:

• Høj specificitet —anvender et lysosomalt GCase-substrat til måling af GCase-aktivitet, hvilket sikrer specifik lysosomal farvning (bemærk, at med lange inkubationer vil den fluorescerende PFB-F migrere til cytoplasmaet)
• Billeddannelse af levende celler —giver mulighed for vurdering af GCase-aktivitet i intakte, levende celler med minimal indvirkning på cellernes levedygtighed, selv med forlænget inkubation
• Enkeltcelleanalyse muliggør —specifik enkeltcelleanalyse med flowcytometri, billeddannelse med højt indhold og mikroskopi for at skelne mellem forskellige celletyper
• Lys fluorescens —giver et lysegrønt fluorescerende farvestof ved spaltning med GCase, hvilket øger detektionsfølsomheden
• Alsidig protokol —kan kombineres med andre fænotypiske indikatorer, såsom levedygtighedsfarvninger og antistoffer, for at identificere forskellige cellepopulationer eller som et selektionskriterium for cellesortering

GCase, kodet af GBA1-genet, er en lysosomal hydrolase, der omdanner glucosylceramid til glucose og ceramid. Mutationer i GBA1, der fører til GCase-mangel, kan forårsage lysosomale lagringsforstyrrelser. GCase-mangler er impliceret i flere sygdomme, herunder Gauchers sygdom og Parkinsons sygdom.