Invitrogen™ Click-iT™ Plus EdU Cell Proliferation Kit til billeddannelse, Alexa Fluor™ 647 farvestof

Click-iT Plus EdU Cell Proliferation billeddannelsessæt er blevet optimeret til fluorescensmikroskopi-applikationer og er et overlegent alternativ til traditionelle proliferationsassays. I dette assay er den modificerede thymidinanalog EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridin, en nukleosidanalog af thymidin) effektivt inkorporeret i nysyntetiseret DNA og fluorescerende mærket med en lys, fotostabil Alexa Fluor™ farvestof i en hurtig, meget specifik, mild klikreaktion.

Find flere værktøjer til billedbaseret detektion af prolifererende celler>

• Simple —fungerer første gang, hver gang, på kortere tid end traditionelle metoder
• Effektiv —ingen denatureringstrin eller hård behandling påkrævet
• Indholdsrige resultater —forbedrede bevarelse af cellemorfologi, antigenstruktur, GFP-fluorescerende signal og DNA-integritet
• Konsistent —ikke afhængig af variable antistoflots til påvisning.

Sættet indeholder alle de komponenter, der er nødvendige for at mærke og detektere den indbyggede EdU samt udføre cellecyklusanalyse på prøver fra adhærente celler. Til cellecyklusanalyse inkluderer sættet en blå fluorescerende Hoechst 33342 farvestof. Sættet indeholder tilstrækkelige reagenser til at mærke 50 18x18 dækglas med 500μ L reaktionsbuffer pr. test.

Undgå de barske behandlinger, der er forbundet med BrdU-metoden.
Måling af ændringer i celleproliferation er en grundlæggende metode til vurdering af cellesundhed, bestemmelse af genotoksicitet og evaluering af lægemidler mod kræft. Den mest nøjagtige metode til at gøre dette er ved direkte at måle DNA-syntese. Den traditionelle metode anvender nukleosidanalogen BrdU (5-bromo-2'-deoxyuridin, en nukleosidanalog af thymidin), som er inkorporeret i nyligt transskriberet DNA. Efter inkorporering behandles prøverne med skrappe metoder (HCl, varme eller enzymer) for at denaturere DNA'et og udsætte BrdU-molekylerne for påvisning af anti-BrdU-antistoffer. BrdU-metoden til at måle celleproliferation er imidlertid tidskrævende og vanskelig at udføre konsekvent. De hårde behandlinger, der er nødvendige for denne metode, kan påvirke prøveintegriteten, cellemorfologien, billedkvaliteten og evnen til multipleks negativt.

De Click-iT™ Plus EdU-assay måler hastigheden af ny DNA-syntese baseret på inkorporering af nukleosidanalogen EdU i DNA. Detektion opnås gennem en katalyseret 'klik'-reaktion, der typisk afsluttes inden for 30 minutter. Klikreaktionen bruger bioortogonale (biologisk unikke) dele til at fluorescerende mærke prolifererende celler, hvilket producerer lav baggrund og høj detektionsfølsomhed. På grund af de milde reaktionsforhold Click-iT™ Plus-assays kan nøjagtigt bestemme celleproliferation og samtidig bevare cellemorfologi, DNA-integritet, antigenbindingssteder og det fluorescerende signal fra GFP. Bevarelse af DNA-integritet giver mulighed for DNA-farvning, herunder farvning med farvestoffer, der bruges til cellecyklusanalyse.