Invitrogen™ CellTracker™ Fluorescerende sonder

Funktionerne ved CellTracker-farvestofferne omfatter:

• Let at bruge —fjerne dyrkningsmedier, tilsæt farvestof, inkuber 15-45 minutter, og billedceller
• Fremragende retention —af fluorescerende signaler i>72 timer (typisk tre til seks generationer)
• Ideelle sporingsfarvestoffer —overvåger cellebevægelser, placering, spredning, migration, kemotaksi og invasion
• Lav —cytotoksicitet påvirker ikke levedygtighed eller proliferation
• Celle alsidighed– arbejder med celler i suspension og adhærente celler

CellTracker-fluorescerende sonder er designet til at passere frit gennem cellemembraner, men når de først er inde i cellen, omdannes de til celleimpermeante reaktionsprodukter. CellTracker-fluorescerende sonder (undtagen CellTracker mørkerød) indeholder en chlormethyl- eller brommethylgruppe, der reagerer med thiolgrupper ved hjælp af en glutathion S-transferase-–medieret reaktion. I de fleste celler er glutathionniveauet højt (op til 10 mM), og glutathiontransferase er allestedsnærværende. CellTracker mørkerød-sonden indeholder en succinimidylester-reaktiv gruppe, som reagerer med amingrupper på proteiner.

Efter konvertering til uigennemtrængelige versioner bevares CellTracker-fluorescerende sonder godt i levende celler gennem flere generationer. Sonderne overføres til datterceller, men overføres ikke til tilstødende celler i en population. Celler, der er fyldt med CellTracker-fluorescerende sonder, viser fluorescens i mindst 72 timer og har ideelle egenskaber som sporingsfarvestof—– de er stabile, ugiftige ved arbejdskoncentrationer, holdes godt fast i cellerne og er stærkt fluorescerende ved fysiologisk pH. Derudover findes der flere CellTracker-fluorescerende sonder med forskellige excitations- og emissionsspektre, som giver mulighed for multiplexing i fluorescensbilleder. CellTracker-farvestofferne bibeholdes med fiksering og permeabilisering, hvilket muliggør deres anvendelse med antistoffer til fluorescensimmunfarvning.

Spektrale egenskaber for de fluorescerende CellTracker-sonder:

• CellTracker blå CMAC —353/466 nm
• CellTracker blå CMF2HC —371/464 nm
• CellTracker blå CMHC —372/470 nm
• CellTracker violet BMQC —415/516 nm
• CellTracker grøn CMFDA —492/517 nm
• CellTracker grøn BODIPY™ —522/529 nm
• CellTracker orange CMTMR —541/565 nm
• CellTracker orange CMR —548/576 nm
• CellTracker rød CMTPX —577/602 nm
• CellTracker mørkerød —630/660 nm

Fluorescerende CellTracker-reagenser omfatter de blå-fluorescerende chlormethylderivater af amino-, hydroxy- og difluorhydroxycoumarin (CMAC, CMHC og CMF2HC), de grønt-fluorescerende chlormethylderivater af fluoresceindiacetat (CMFDA) og en BODIPY™ farvestof, den orange-fluorescerende CMTMR og CMRA, og den rød-fluorescerende CMTPX. CellTracker Blå CMAC, CMHC og CMF2HC, CellTracker Violet, det violet-fluorescerende bromethylderivat af kumarin (BMQC), CellTracker grøn BODIPY™, CellTracker orange CMTMR og CellTracker rød CMTPX kræver ikke enzymatisk spaltning for at aktivere deres fluorescens, hvorimod den grønne CMFDA og den orange CMRA kræver enzymatisk spaltning. De uigennemtrængelige reaktionsprodukter af chlormethyl- eller bromethylcoumarinerne har fremragende retention, stærk fluorescens og relativt ensartet cytoplasmatisk farvning, hvilket gør disse derivater potentielt nyttige til at korrigere bevægelsesartefakter i billeddannelsen. CMFDA er farveløs og ikke-fluorescerende, indtil cytosoliske esteraser spalter acetaterne fra og frigiver et stærkt fluorescerende produkt.

Ud over den klare fluorescens og den fremragende retention bidrager CellTracker-fluorescerende sonder ikke til cytotoksicitet.