Invitrogen™ Calcein AM, cellegennemtrængende grønne og blå farvestoffer

Cellevitalitet målt ved intracellulær esteraseaktivitet er en anerkendt parameter for cellesundhed. Levende celler er kendetegnet ved tilstedeværelsen af allestedsnærværende intracellulær esteraseaktivitet, bestemt af den enzymatiske omdannelse af det praktisk talt ikke-fluorescerende cellegennemtrængende Calcein AM til det intenst fluorescerende Calcein Green (ex/em 494/517 nm) eller Calcein Blue (ex/em 360/449). Apoptotiske og døde celler med kompromitterede membraner bevarer ikke Calcein.

Acetoxymethyl (AM) esterderivaterne af fluorescerende indikatorer udgør en af de mest nyttige grupper af forbindelser til undersøgelse af levende celler. Når først de er inde i cellen, spaltes de lipofile blokerende grupper af uspecifikke esteraser, hvilket resulterer i en ladet form, der tilbageholdes i cellerne i meget højere grad end dens moderforbindelse.

Ud over cellelevedygtighedsassays bruges Calcein AM også til at studere cellemigration, celleadhæsion og cellulære optagelsesprocesser. Dens fluorescensegenskaber gør det til et alsidigt værktøj til forskellige anvendelser inden for cellebiologisk forskning.

Anvendelse af det ikke-AM Calcein celle-impermeant farvestof:

Calcein, AM kræver esterasespaltning af acetoxymethyl (AM) esteren for at blive fluorescerende. Liposomer har ikke esteraser, medmindre de er specifikt konstrueret til at inkludere enzymet. Den vandopløselige, ikke-AM-form af Calcein (Kat.nr. C481), kræver ikke esterasespaltning for at være fluorescerende.

Denne alsidige grønne fluorofor er celleimpermeant og bruges almindeligvis til cellesporing og i undersøgelser af endocytose og gap junctions.

Funktioner af Calcein AM cellegennemtrængende farvestof:

• Cellegennemtrængende Calcein —AM er cellegennemtrængende, hvilket betyder, at det kan passere gennem cellemembranen og trænge ind i levende celler. Denne egenskab giver forskere mulighed for at mærke og visualisere intracellulære strukturer og processer.
• Ikke-toksisk —Calcein AM er ikke-toksisk for celler og påvirker ikke cellens funktion eller stofskifte væsentligt.
• Esterasespaltning —Når først de er inde i cellen, spaltes acetoxymethyl (AM) estergruppen af Calcein AM af intracellulære esteraser, hvilket resulterer i dannelsen af Calcein. Denne spaltningsproces aktiverer fluorescensen af Calcein, hvilket muliggør let påvisning og visualisering.
• Ensartet fordeling —Ved indtræden i levende celler fordeler Calcein AM sig ensartet i hele cytoplasmaet og kernen. Denne jævne fordeling muliggør nøjagtig vurdering og visualisering af cellulære processer.
• Stabilitet —Calcein AM er relativt stabilt i celler og kan bruges til langsigtede billeddannelsesforsøg uden væsentlig fotoblegning.
• Fluorogent —Calcein AM er en ikke-fluorescerende forbindelse, men når den først er inde i cellen, spaltes den af intracellulære esteraser, hvilket resulterer i dannelsen af fluorescerende Calcein.
• Lys og stabil fluorescens —Calcein udviser lysegrøn eller blå fluorescens, når det binder til intracellulære frie calciumioner eller andre mål. Den resulterende fluorescens er stabil, hvilket giver mulighed for langsigtet billeddannelse og analyse.

Anvendelse af Calcein AM cellegennemtrængende farvestof:

Calcein AM kan bruges i forskellige applikationer, herunder cellelevedygtighedsassays, cellemigration og invasionsundersøgelser, intracellulær calcium-billeddannelse, cellemærkning og -sporing og fluorescensmikroskopi og flowcytometri.

• Cellelevedygtighed —Calcein AM bruges ofte til at vurdere cellelevedygtighed og cytotoksicitet. Levende celler med intakte cellemembraner kan optage Calcein AM, som derefter spaltes af intracellulære esteraser for at producere fluorescerende Calcein. Fluorescensintensiteten af Calcein kan måles for at bestemme cellelevedygtighed.
• Cellemigration —Calcein AM kan bruges til at spore og visualisere cellemigration. Ved at mærke celler med Calcein AM kan deres bevægelse og migration overvåges over tid ved hjælp af fluorescensmikroskopi. Dette er især nyttigt til at studere processer såsom sårheling, metastaser og cellehandel.
• Celleadhæsion —Calcein AM kan bruges til at studere celleadhæsion og celle-substrat interaktioner. Ved at mærke celler med Calcein AM og dyrke dem på forskellige substrater kan cellernes adhæsionsegenskaber vurderes. Ændringer i fluorescensintensitet kan indikere forskelle i celleadhæsion.
• Cellulær optagelse —Calcein AM kan bruges til at undersøge cellulære optagelsesprocesser. Ved at mærke molekyler eller nanopartikler med Calcein AM, kan deres optagelse af celler spores og analyseres. Dette er værdifuldt til at studere lægemiddelleveringsmekanismer og forståelse af cellulære optagelsesveje.
• Intracellulære pH-målinger —Calcein AM er blevet brugt som et pH-følsomt farvestof til at måle ændringer i intracellulær pH. Calceins fluorescensegenskaber kan moduleres af pH, hvilket gør det muligt for forskere at overvåge pH-ændringer i celler.