Invitrogen™ ATP Bestemmelsessæt

Funktionerne ATP i Determination Kit inkluderer:

• Anvender et luminescensbaseret system til at overvåge lysudsendelse, hvilket muliggør følsom og præcis kvantificering af ATP niveauer
• Tilbyder enestående følsomhed, i stand til at detektere så lidt som 0,1 picomol af forudeksisterende ATP eller ATP genereret i kinetiske systemer
• Anvender en unik formulering, hvor luciferase- og luciferinkomponenterne pakkes separat, hvilket gør det muligt for forskere at optimere analysebetingelserne for deres specifikke prøver og instrumenter
• Indeholder en generøs forsyning af reagenser, tilstrækkelig til at udføre 200 ATP assays med 500 μl prøvevolumen eller 1.000 ATP assays med 100 μl prøvevolumer (nok til ti 96-brønd pladeassays)
• Faciliterer kvantitativ analyse af ATP niveauer i en bred vifte af biologiske og miljømæssige prøver samt eksperimentelle systemer
• Udnytter den meget specifikke og følsomme bioluminescensreaktion mellem luciferin og luciferase i nærvær af ATP, hvilket giver en pålidelig og reproducerbar metode til ATP kvantificering
• Kompatibel med forskellige luminometre og mikropladelæsere med luminescenstilstand, hvilket gør den til et alsidigt værktøj til ATP detektion i forskellige forskningsmiljøer

Princippet for den ATP-afhængige bioluminescerende reaktion

ATP Determination Kit er baseret på det absolutte krav af luciferase for ATP at producere lys. I nærvær af Mg²⁺ katalyserer luciferaseenzymet reaktionen mellem luciferin, ATP,_{og O2} for at danne oxyluciferin, AMP, CO₂, pyrofosfat og lys med en emission på cirka 560 nm ved pH 7,8. Det luminescerende signal, der genereres, er direkte proportionalt med mængden af ATP, hvilket muliggør måling af ATP niveauer.

Mål ATP niveauer i opløsning eller cellelysater

Assay-reagenserne i ATP Determination Kit er ikke permeable for levende og intakte celler, hvilket gør dette assay velegnet til at måle ekstracellulære ATP eller ATP fra prøver i opløsning. For at måle intracellulære ATP niveauer til cellesundhed eller levedygtighedsanalyser kræves cellelys, som frigives ATP fra cellerne. Lysisbuffer-muligheder, der er kompatible med luciferase-luciferin-reaktionen, inkluderer Pierce Luciferase Cell Lysis Buffer (2X) (Kat. Nr. 16189) og 20X cellelysebufferformuleringen, der er angivet nedenfor. 20X-bufferen bør fortyndes 1:20 med vand og bruges straks til cellelys, før luciferase-assay ATP køres.

20X lysis-buffer:

• 200 mM Tri (pH 7,5)
• 2 M NaCl
• 20 mM EDTA
• 0.2% Triton X-100

Omfattende og alsidigt ATP assay-kit

ATP er et kritisk molekyle, der findes i alle levende celler, og er energikilden til forskellige biologiske processer, herunder muskelkontraktion, nerveimpulsudplantning og biokemisk syntese. ATP Niveauerne måles ofte for at bestemme cellulær levedygtighed og stofskifte, vurdere mitokondriers funktion og aktivitet eller opdage bakteriel og mikrobiel forurening. Dette luciferasebaserede ATP detektionskit giver en alsidig og følsom metode til at måle ATP produktionen i forskellige enzymatiske reaktioner, herunder ATPase og NADPH oxidase, samt til at overvåge ATP frigivelse fra celler.

Luciferin-luciferase-luminescenstesten –kan bruges til at påvise lavniveau bakteriel forurening i biologiske prøver som blod, mælk og urin samt miljøprøver til test af vand, jord og slam. ATP Detektion er også blevet brugt til at studere virkningerne af antibiotika på bakteriepopulationer, bestemme celleproliferation og cytotoksicitet i både bakterielle og pattedyrsceller samt skelne mellem cytostatisk og cytocidal potentiale af anticancerlægemidler på maligne celler.