Invitrogen™ ATP Bestemmelsessæt

Funktioner af ATP Bestemmelsessættet inkluderer:

• Anvender et luminescensbaseret system til at overvåge lysemission, hvilket muliggør følsom og nøjagtig kvantificering af ATP niveauer
• Tilbyder enestående følsomhed, i stand til at detektere så lidt som 0,1 picomole allerede eksisterende ATP eller ATP genereret i kinetiske systemer
• Anvender en unik formulering, hvor luciferase- og luciferinkomponenterne pakkes separat, hvilket gør det muligt for forskere at optimere assaybetingelserne for deres specifikke prøver og instrumenter
• Inkluderer en generøs forsyning af reagenser, tilstrækkelig til at udføre 200 ATP analyser ved hjælp af 500μ L prøvevolumener eller 1.000 ATP analyser ved hjælp af 100μ L prøvevolumener (nok til ti 96-brønds pladeassays)
• Faciliterer kvantitativ analyse af ATP niveauer i en bred vifte af biologiske og miljømæssige prøver og eksperimentelle systemer
• Udnytter den meget specifikke og følsomme bioluminescensreaktion mellem luciferin og luciferase i nærvær af ATP , der giver en pålidelig og reproducerbar metode til ATP kvantificering
• Kompatibel med forskellige luminometre og mikropladelæsere med en luminescenstilstand, hvilket gør det til et alsidigt værktøj til ATP opdagelse i forskellige forskningsmiljøer

Princippet for den ATP-afhængige bioluminescerende reaktion

De ATP Determination Kit er baseret på det absolutte krav om luciferase til ATP at producere lys. I nærvær af Mg ²⁺ katalyserer luciferase-enzymet reaktionen af luciferin, ATP og O ₂ for at danne oxyluciferin, AMP, CO ₂ , pyrophosphat og lys med en emission på ca. 560 nm ved pH 7,8. Det luminescerende signal, der genereres, er direkte proportional med mængden af ATP , hvilket giver mulighed for måling af ATP niveauer.

Måle ATP niveauer i opløsning eller cellelysater

Analysereagenserne i ATP Bestemmelsessættet er ikke permeable for levende og intakte celler, hvilket gør denne analyse velegnet til måling af ekstracellulært ATP eller ATP fra prøver i opløsning. At måle intracellulært ATP niveauer for cellesundheds- eller levedygtighedsassays, er cellelyse nødvendig for at frigive ATP fra cellerne. Lysisbuffermuligheder, der er kompatible med luciferase-luciferin-reaktionen, omfatter Pierce Luciferase Cell Lysis Buffer (2X) (Kat. nr. 16189) og 20X cellelysebufferformuleringen anført nedenfor. 20X bufferen skal fortyndes 1:20 med vand og bruges straks til cellelyse før luciferasen køres ATP assay.

20X lyseringsbuffer:

• 200 mM Tris (pH 7,5)
• 2 M NaCl
• 20 mM EDTA
• 0,2 % Triton X-100

Omfattende og alsidig ATP assay kit

ATP er et kritisk molekyle, der findes i alle levende celler og er energikilden til forskellige biologiske processer, herunder muskelsammentrækning, nerveimpulsudbredelse og biokemisk syntese. ATP niveauer måles ofte for at bestemme cellulær levedygtighed og metabolisme, vurdere mitokondriers funktion og aktivitet eller detektere bakteriel og mikrobiel forurening. Denne luciferase-baserede ATP detektionskit giver en alsidig og følsom metode til måling ATP produktion i forskellige enzymatiske reaktioner, herunder ATPase og NADPH oxidase, og monitorering ATP frigivelse fra celler.

Luciferin-–luciferase-luminescensanalysen kan bruges til at detektere bakteriel kontaminering på lavt niveau i biologiske prøver såsom blod, mælk og urin, sammen med miljøprøver til test af vand, jord og slam. ATP Detektion er også blevet brugt til at studere virkningerne af antibiotika på bakteriepopulationer, bestemme celleproliferation og cytotoksicitet i både bakterielle og pattedyrceller og skelne mellem cytostatisk kontra cytocidalt potentiale af anticancerlægemidler på malign cellevækst.