Thermo Scientific™ Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

Dette sæt muliggør syntese af lange cDNA'er op til 20 kb ved forhøjede temperaturer (op til 65 °C), hvilket overgår andre systemers evne til at producere fuldlængde cDNA. På grund af øgede syntesehastigheder kan reaktionen gennemføres på 30 minutter.

Til reverse transkription bruger Maxima sættet H Minus Reverse Transcriptase (RT), som er et avanceret enzym udledt ved in vitro-evolution af MMLV RT.

Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit med dsDNase giver en dramatisk forenklet arbejdsgang, der kombinerer genomisk DNA-eliminering og cDNA-syntese i en enkelt rørsprocedure. Sættet indeholder en ny dobbeltstrengsspecifik DNase (dsDNase), der er konstrueret til at fjerne forurenende genomisk DNA fra RNA-preps på to minutter uden skade på kvalitet eller mængde af RNA. Meget specifik dsDNase-aktivitet mod dobbeltstrenget DNA sikrer, at enkeltstrenget DNA (såsom cDNA og primere) ikke bliver kløvet, og dsDNase-behandlet RNA kan tilsættes direkte til reverse transcription.

Funktioner i Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit inkluderer:

• Øgede reaktionstemperaturer—kan den første cDNA-streng syntetiseres inden for temperaturområdet 42-65 – °C
• Høje udbytter af fuldlængde første streng cDNA—med RNA-skabeloner op til 20 kb
• Fleksibel priming—oligo(dT)₁₈, tilfældige hexamer eller gen-specifikke primere
• Integreret genomisk DNA-fjernelsestrin med dsDNase-kit

Applikationer

• Fuldlængde cDNA-syntese for lange transkripter og ORF'er
• Omvendt transkription ved forhøjede temperaturer for at reducere effekten af sekundær struktur
• cDNA-kloning og konstruktionsgenerering
• RNA-seq & enkeltcelle RNA-seq bibliotekforberedelse
• Isoform- og transkriptkarakterisering
• Skabelonskiftende fuldlængde RNA-seq

Yderligere information om reaktionskomponenter

• Maxima H Minus Enzyme Mix indeholder Maxima H minus reverse og Transcriptase RiboLock RNase-hæmmer. RiboLock RNase-hæmmer beskytter effektivt RNA-skabeloner mod nedbrydning af RNaserne A, B og C ved temperaturer op til 55 °C.
• Oligo(dT)₁₈ og tilfældige hexamerprimere følger med sættet. Tilfældige hexamerprimere binder ikke-specifikt og bruges til at syntetisere cDNA fra alle RNA'er i en samlet RNA-population. Oligo(dT)18-primeren anneder selektivt til 3'-enden af poly(A) RNA og syntetiserer cDNA udelukkende fra poly(A)-halet mRNA. Genspecifikke primere kan også bruges sammen med sættet til at prime syntese fra en specificeret sekvens.
• 10 mM dNTP Mix er en forblandet vandløsning af dATP, dTTP, dCTP og dGTP.
• Nukleasefrit vand leveres til reaktionsopsætning og fortynding af prøve-DNA. Fraværet af endo-, exodeoxyribonucleer, ribonucleer og fosfataser er blevet bekræftet ved passende kvalitetstests.