Thermo Scientific™ Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

Beskrivelse

Thermo Scientific Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit, tilgængeligt med eller uden dsDNase, er et komplet system til højeffektiv syntese af første streng cDNA. Sættet bruger Maxima H minus omvendt Transcriptase (RT), som er et avanceret enzym afledt af in vitro-udvikling af MMLV RT. Enzymet har den højeste termostabilitet blandt derivaterne af MMLV RT og mangler RNase H-aktivitet.

Dette sæt tillader syntese af lange cDNA'er op til 20 kb ved forhøjede temperaturer (op til 65 °C), og erstatter andre systemers evner til at producere fuldlængde cDNA. På grund af øgede syntesehastigheder kan reaktionen fuldføres på 30 minutter.

Til omvendt transskription bruger sættet Maxima H minus omvendt Transcriptase (RT), som er et avanceret enzym afledt af in vitro -udvikling af MMLV RT.

De Maxima H Minus First Strand cDNA-syntesesæt med dsDNase giver en dramatisk forenklet arbejdsgang, der kombinerer genomisk DNA-eliminering og cDNA-syntese i én-rørsprocedure. Sættet indeholder en ny dobbeltstrengsspecifik DNase (dsDNase), der er udviklet til at fjerne kontaminerende genomisk DNA fra RNA-præparationer på to minutter uden at beskadige kvaliteten eller mængden af RNA. Meget specifik dsDNase-aktivitet mod dobbeltstrenget DNA sikrer, at enkeltstrenget DNA (såsom cDNA og primere) ikke spaltes, og dsDNase-behandlet RNA kan tilsættes direkte til revers transkription.

Funktioner af Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit inkluderer:
• Forøgede reaktionstemperaturer —den første streng af cDNA kan syntetiseres inden for temperaturområdet 42 –65 °C
• Højt udbytte af førstestrengs cDNA i fuld længde med —RNA-skabeloner op til 20 kb
• Fleksibel priming oligo(—dT) ₁₈ , tilfældige hexamer eller genspecifikke primere
• Integreret genomisk DNA-fjernelsestrin med dsDNase-kit

Anvendelser First
•Strand cDNA-syntese til RT-PCR
• Konstruktion af cDNA-biblioteker
• Generering af prober til hybridisering
• Antisense RNA syntese

Indhold
• Maxima H Minus Enzym Mix
• Oligo(dT) ₁₈ og Random hexamer primere
• 5X RT buffer
• dNTP-mix
• Nukleasefrit vand First

Strand Synthesis Kit med dsDNase indeholder også
• dsDNase og 10X dsDNase Buffer

Yderligere oplysninger om reaktionskomponenter
• Maxima H Minus Enzyme Mix indeholder Maxima H minus omvendt Transcriptase og RiboLock RNase-hæmmer. RiboLock RNase-hæmmer beskytter effektivt RNA-skabeloner mod nedbrydning af RNaser A, B og C ved temperaturer op til 55 °C.
• Oligo(dT) ₁₈ og random hexamer primere leveres med sættet. Tilfældige hexamer-primere binder ikke-specifikt og bruges til at syntetisere cDNA fra alle RNA'er i en total RNA-population. Oligo(dT)18-primeren annealerer selektivt til 3'-enden af poly(A)-RNA og syntetiserer kun cDNA fra poly(A)-hale-mRNA. Genspecifikke primere kan også anvendes med kittet til at prime syntese fra en specificeret sekvens.
• 10 mM dNTP Mix er en forblandet vandig opløsning af dATP, dTTP, dCTP og dGTP.
• Nukleasefrit vand leveres til reaktionsopsætning og fortynding af prøve-DNA. Fraværet af endo-, exodeoxyribonukleaser, ribonukleaser og fosfataser er blevet bekræftet ved passende kvalitetstest.