Thermo Scientific™ Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

Mastermixet indeholder Maxima H minus omvendt Transcriptase (RT) og RiboLock RNase-hæmmer. Maxima H Minus RT er et avanceret enzym afledt af M-MuLV RT ved in vitro-evolution. Enzymet har høj termostabilitet, robusthed, processivitet, øget cDNA-syntesehastighed og mangel på RNase H-aktivitet. Den rekombinante RiboLock RNase-hæmmer beskytter effektivt RNA-skabelon mod nedbrydning af RNaser A, B og C ved temperaturer op til 55 °C. Masterblandingen indeholder også reaktionsbuffer, dNTP'er, oligo (dT) ₁₈ og tilfældige hexamer-primere. Et separat rør med No-RT kontrolblanding er også tilvejebragt for praktisk RT negativ kontrol.

Begge sæt er i stand til reproducerbar cDNA-syntese ved forhøjede temperaturer (50 °C –65 °C). Syntesereaktionen er typisk afsluttet på 15 30 –minutter. Den inkluderede dobbeltstrengede specifikke DNase i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med dsDNase tillader fjernelse af genomisk DNA fra RNA-prøver på to minutter uden at påvirke kvaliteten eller kvantiteten af RNA. Denne dsDNase er også tilgængelig separat (kat. nr. EN0771).

Funktioner af Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix inkluderer:
• Et-rørs mastermix hjælper med at reducere pipetteringstrin og forbedret konsistens i RT-qPCR-resultater
• Øget RT-effektivitet på tværs af en bred vifte af input-RNA-mængder og genmål
• Høj termostabilitet for at tillade –RT-°reaktioner ved 50 65 C temperaturområde
• Integreret trin af genomisk DNA-fjernelse fra RNA-prøver (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix kun med dsDNase)

Yderligere information om reaktionskomponenter
• No RT kontrolblandingen indeholder alle komponenterne i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix undtagen RT. Tilstedeværelsen af et PCR-produkt i No RT-kontrolreaktionen indikerer, at reaktionen er kontamineret med DNA. For yderligere at forbedre effektiviteten til eliminering af genomisk DNA anbefales inkubation af template RNA med dsDNase (Kat. nr. EN0771).
• Nukleasefrit vand leveres til reaktionsopsætning og fortynding af prøve-DNA. Fraværet af exodeoxyribonukleaser, ribonukleaser og fosfataser er blevet bekræftet ved passende kvalitetstest.
• For yderligere at forbedre effektiviteten af eliminering af genomisk DNA anbefales inkubation af template RNA med den inkluderede dsDNase kraftigt. (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix kun med dsDNase)
• dsDNasen bruges til hurtig og sikker fjernelse af kontaminerende genomisk DNA fra RNA-prøver. dsDNase inaktiveres let ved moderat varmebehandling (55 °C). Det giver mulighed for en dramatisk forenklet arbejdsgang, der kombinerer genomisk DNA-eliminering og cDNA-syntese i én-rørsprocedure. (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix kun med dsDNase)