Thermo Scientific™ Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

Mastermixen indeholder Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT) og RiboLock RNase-hæmmer. Maxima H Minus RT er et avanceret enzym, der er afledt af M-MuLV RT ved in vitro-evolution. Enzymet har høj termostabilitet, robusthed, processivitet, øget cDNA-syntesehastighed og mangel på RNase-H-aktivitet. Den rekombinante RiboLock RNase-hæmmer beskytter effektivt RNA-skabelonen mod nedbrydning af RNaserne A, B og C ved temperaturer op til 55 °C. Masterblandingen indeholder også reaktionsbuffer, dNTP'er, oligo (dT)₁₈ og tilfældige hexamerprimere. Et separat rør med No-RT kontrolblanding leveres også for nem RT-negativ kontrol.

Begge sæt kan reproducere cDNA-syntese ved forhøjede temperaturer (50 °C –, 65 °C). Syntesereaktionen er typisk færdig på 15-30 –minutter. Den inkluderede dobbeltstrengede specifikke DNase i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med dsDNase muliggør fjernelse af genomisk DNA fra RNA-prøver på to minutter uden at påvirke kvaliteten eller mængden af RNA. Denne dsDNase er også tilgængelig separat (Cat. Nej. EN0771).

Funktioner i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix inkluderer:

• One-tube mastermix hjælper med at reducere pipetteringstrin og øger konsistensen i RT-qPCR-resultater
• Øget RT-effektivitet på tværs af et bredt spektrum af inputmængder af RNA og genmål
• Høj termostabilitet for at tillade RT-reaktioner ved 50-65 – °C temperaturområde
• Integreret trin med fjernelse af genomisk DNA fra RNA-prøver (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med kun dsDNase)

• Fuldlængde cDNA-syntese for lange transkripter og ORF'er
• Omvendt transkription ved forhøjede temperaturer for at reducere effekten af sekundær struktur
• cDNA-kloning og konstruktionsgenerering
• RNA-seq & enkeltcelle RNA-seq bibliotekforberedelse
• Isoform- og transkriptkarakterisering
• Skabelonskiftende fuldlængde RNA-seq

Yderligere information om reaktionskomponenter

• No RT kontrolmixet indeholder alle komponenterne i H Minus cDNA Synthesis Master Mix undtagen Maxima RT. Tilstedeværelsen af et PCR-produkt i No RT-kontrolreaktionen indikerer, at reaktionen er forurenet med DNA. For yderligere at forbedre effektiviteten af genomisk DNA-eliminering, kan skabelon-RNA-inkubation med dsDNase (Cat. Nej. EN0771) anbefales kraftigt.
• Nukleasefrit vand leveres til reaktionsopsætning og fortynding af prøve-DNA. Fraværet af exodeoxyribonucleer, ribonukler og fosfataser er blevet bekræftet ved passende kvalitetstests.
• For yderligere at forbedre effektiviteten af eliminering af genomisk DNA anbefales det kraftigt at inkubere skabelon-RNA med den inkluderede dsDNase. (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med kun dsDNase)
• dsDNasen bruges til hurtig og sikker fjernelse af forurenende genomisk DNA fra RNA-prøver. dsDNase inaktiveres let ved moderat varmebehandling (55 °C). Det muliggør en dramatisk forenklet arbejdsgang, der kombinerer genomisk DNA-eliminering og cDNA-syntese i en enkelt rørsprocedure. (Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med kun dsDNase)