Få mere at vide
Thermo Scientific™ Massespektrometri-kompatible tværbindere
Beskrivelse
Kemisk tværbinding i kombination med massespektrometri er en kraftfuld metode til at forbedre proteinkarakterisering og identificere protein-protein-interaktioner. Denne metode er blevet anvendt på rekombinante og native proteinkomplekser og for nylig på helcellelysater eller intakte encellede organismer i bestræbelserne på at identificere protein-protein-interaktioner på globalt plan. Berigelsesegenskaben ved DSPP og TBDSPP forbedrer detektion af tværbundne proteiner ved at reducere prøvekompleksiteten gennem adskillelse af tværbundne fra ikke-tværbundne peptider.
• Krystallinske reagenser med høj renhed til proteinstruktur og interaktionskarakterisering
• Membran-permeable version (TBDSPP) til intracellulær tværbinding
• Kan beriges med Fe-NTA IMAC eller TiO 2 MOAC
DSPP (disuccinimidyl phenyl phosphonsyre, PhoX) og TBDSPP (tert-butyl disuccinimidyl phenyl phosphonat, tBu-PhoX) er phospho-berigede tværbindere, der indeholder en amin-reaktiv N-hydroxysuccinimid (NHS) ester med en 7-atomarm ende af en phosphonsyregruppe (DSPP) eller fosfonatester (TBDSPP) til berigelse. Begge reagerer effektivt med primære amingrupper (-NH2) i pH 7 –9 buffere for at danne stabile amidbindinger. Phosphonsyre- eller phosphonatestergrupperne kan derefter anvendes til at berige tværbundne peptider under anvendelse af immobiliseret metalaffinitetskromatografi (IMAC) eller metaloxidaffinitetskromatografi (MOAC).
Af de to berigelige MS-tværbindingsmidler er DSPP mere vandopløseligt end TBDSPP og er bedre til in vitro-tværbinding, simple oprensede proteiner og proteinkomplekser. TBDSPP er bedre til intracellulær tværbinding på grund af øget membranpermeabilitet. Selvom begge tværbindere kan beriges ved anvendelse af traditionelle phosphopeptidmetoder, skal TBDSPP tværbundne peptider først inkuberes med TFA for at fjerne tert-butylbeskyttelsesgrupperne. TBDSPP-phosphonsyregruppen (efter syrespaltning) er ikke et substrat for phosphataser, hvilket giver mulighed for fjernelse af endogene phosphopeptider i prøver før berigelse.
Bemærk: Til højopløsningsanalyse af de tværbundne peptider er den anbefalede LC-kolonne for Nanospray Flex-kilden Acclaim PepMap 100 C18 LC-søjle (kat. nr. 164940 eller 164568). For EASY-Spray-kilden er den anbefalede LC-kolonne EASY-Spray C18 LC-kolonnen (kat. nr. ES900 eller ES904).
Tekniske data
Tekniske data
| Kemisk reaktivitet | Amin-amin |
| Spaltbar | Nej |
| Oversigt | DSPP |
| Molekylvægt (g/mol) | 440.25 |
| PEGyleret | Nej |
| Renhed | 90% |
| Afstandsarmslængde | 4,3 Å |
| Indhold og opbevaring | Opbevares ved modtagelse ved -20 °C beskyttet mod fugt. |
| Cellepermeabilitet | Nej |
| Produktlinje | MS-reagenser |
| Vis mere |
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.